?；撬釋?duì)苯并(a)芘致人胚肝細(xì)胞DNA損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：苯并(a)芘作為多環(huán)芳烴類(PAHs)的代表，是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的環(huán)境致癌物，具有很強(qiáng)的致癌性，可引起人類的多種癌癥，是自然界和食品中廣泛存在的污染物。而牛磺酸(Taurine，Tau)是一種人體內(nèi)含量豐富的具有多種生物學(xué)功能的自由氨基酸，其抗氧化對(duì)多種肝損傷的保護(hù)作用正日益受到關(guān)注。?；撬嵩谵卓笲(a)P致肝細(xì)胞DNA損傷方面的作用如何，其機(jī)制如何，相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道極少。本研究旨在了解B(a)P對(duì)肝細(xì)胞DNA損傷作用以及?；撬岬母深A(yù)作用

2、，并探索?；撬岬母深A(yù)機(jī)制。 方法：以人胚細(xì)胞(L-02細(xì)胞)為靶細(xì)胞，采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。L-02細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、生長(zhǎng)良好的細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)。?；撬嵩O(shè)1.0、2.0、4.0mmol/L3個(gè)濃度，B(a)P設(shè)12.5、25、50μmol/L三個(gè)劑量。試驗(yàn)隨機(jī)分為5組：(1)空白對(duì)照組；(2)溶劑對(duì)照組；(3)B(a)P染毒組；(4)牛磺酸組：各個(gè)濃度?；撬峒尤肱囵B(yǎng)體系后繼續(xù)培養(yǎng)72h；(5)?；撬岣深A(yù)組：L-0

3、2細(xì)胞先以3個(gè)不同濃度的?；撬犷A(yù)處理48h，再加入25μmol/L的B(a)P培養(yǎng)24h；進(jìn)行I相代謝酶(CYP1A1、CYP2B)活性檢測(cè)時(shí)，增加陽(yáng)性對(duì)照組三甲基膽葸(3-MC)。每組設(shè)三個(gè)平行樣。運(yùn)用熒光分光光度法、比色法以及胞質(zhì)分裂阻滯法微核試驗(yàn)(CBMNT)，檢測(cè)各處理組L-02細(xì)胞色素P4501A1(cytochrome P4501A1，CYP1A1)活性(7-乙氧基-3-異吩噁唑酮-脫乙基酶，EROD)、細(xì)胞色素P4502B

4、(CYP2B)活性(7-戊氧基-3-異吩噁唑酮—脫戊氧基酶，PROD)及微核率(MN‰)和核分裂指數(shù)(NDI)。 結(jié)果：(1)B(a)P對(duì)人胚肝細(xì)胞的毒性：12.5、25、50μmol/L的B(a)P在體外試驗(yàn)中均能引起L-02細(xì)胞明顯的DNA損傷，其誘導(dǎo)的微核率、核分裂指數(shù)與溶劑對(duì)照組相比差異均有顯著性(P<0.01)；各等級(jí)劑量間誘導(dǎo)的DNA損傷有顯著性差異，呈劑量依賴性關(guān)系。三個(gè)不同劑量的B(a)P均誘導(dǎo)L-02細(xì)胞代謝酶

5、CYP1A1、CYP2B酶活性增高，并呈劑量依賴性升高。(2)牛磺酸對(duì)B(a)P致L-02細(xì)胞損傷的保護(hù)作用：1.0-4.0mmol/L的?；撬岣深A(yù)組引起的L-02細(xì)胞微核率和核分裂指數(shù)與溶劑對(duì)照組比較無(wú)顯著差異，且能明顯減輕25μmol/L的B(a)P引起的肝細(xì)胞DNA損傷，其微核率與B(a)P染毒組相比差異有顯著性(P<0.01)，且微核率隨著?；撬釢舛仍龃蠖鴾p小，4.0mmol/L牛磺酸保護(hù)作用尤其明顯；各劑量?；撬岣深A(yù)組誘導(dǎo)的核

6、分裂指數(shù)均比B(a)P染毒組顯著性高(P<0.01)，4.0mmol/L牛磺酸干預(yù)組誘導(dǎo)的核分裂指數(shù)最高。各濃度?；撬岣深A(yù)組細(xì)胞代謝酶CYP1A1、CYP2B活性與單純B(a)P染毒組比有顯著性差異(P<0.01)，說(shuō)明?；撬崮苊黠@抑制細(xì)胞代謝酶CYP1A1、CYP2B活性。Spearman秩相關(guān)分析表明，代表L-02細(xì)胞DNA損傷的微核率與細(xì)胞代謝酶CYP1A1、CYP2B活性呈明顯正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)r及P值分別為F=0.926，P<0

7、.01；r=0.814，P<0.01)；核分裂指數(shù)與細(xì)胞代謝酶CYP1A1、CYP2B活性成負(fù)相關(guān)(相關(guān)系數(shù)r及P值分別為r=-0.416,P<0.05； F=-0.389,P<0.05)。 結(jié)論：B(a)P可誘導(dǎo)L-02細(xì)胞DNA損傷，在12.5μmol/L較低濃度下即能產(chǎn)生明顯損傷作用；B(a)P誘導(dǎo)肝細(xì)胞代謝酶CYP1A1、CYP2B活性增加，并呈劑量依賴性增加。1.0～4.0mmol/L的牛磺酸干預(yù)組可拮抗B(a)P誘導(dǎo)