砷對皮膚細胞凋亡及角化相關基因表達的影響與早期皮膚損傷研究.pdf

1、目的:探討砷對皮膚細胞凋亡及相關角化基因表達情況的影響，為進一步闡述砷致皮膚早期損傷的研究提供依據(jù)。
　　方法:
　　1、采用MTT還原法檢測細胞生長情況;確定LC50及染毒濃度，染毒濃度分別為LC50的1/50、1/20、1/10。
　　2、流式細胞儀檢測HaCaT細胞的凋亡情況。
　　3、將30只健康成年清潔級雄性家兔隨機分為5組，每組6只，分別為對照組（去離子水）及亞砷酸鈉染毒組。采用自由飲水方式進行染毒，

2、連續(xù)染毒12周。染毒劑量分別為LD50的1/100、1/50、1/20、1/10。
　　4、染毒12周結(jié)束后，取家兔同一部位的皮膚進行病理學檢查。
　　5、通過實時熒光定量(Real-TimeQuantitative PCR)檢測HaCaT細胞中和家兔皮膚組織中Nrf2、K1和K10mRNA的表達水平。
　　結(jié)果:
　　1、亞砷酸鈉染毒HaCaT細胞24h的LC50為65.00μmol/L，染毒濃度即LC50的1

3、/50為1.30μmol/L，LC50的1/20為3.25μmol/L，LC50的1/10為6.50μmol/L，對照組為0μmol/L。
　　2、1.30μmol/L亞砷酸鈉染毒48h能顯著促進HaCaT細胞增殖;3.25μmol/L亞砷酸鈉染毒96h、6.25μmol/L亞砷酸鈉染毒72h顯著抑制HaCaT細胞增殖，且差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。
　　3、1.30μmol/L亞砷酸鈉能抑制HaCaT細胞凋亡，24h

4、時凋亡率最低且差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);3.25μmol/L、6.25μmol/L亞砷酸鈉染毒48h、72h可使HaCaT細胞凋亡率逐漸升高且差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　4、1.30μmol/L亞砷酸鈉染毒HaCaT細胞24h能促進Nrf2mRNA、K1mRNA和K10mRNA的表達上調(diào)，6.25μmol/L的亞砷酸鈉染毒72h可使HaCaT細胞中Nrf2mRNA、K1mRNA、K10 mRNA表達顯著下調(diào)且差

5、異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　5、亞砷酸鈉染毒家兔的LD50為13mg/kg，染毒劑量即LD50的1/100為0.13mg/kg、LD50的1/50為0.26mg/kg、LD50的1/20為0.65mg/kg、LD50的1/10為1.30mg/kg，對照組0 mg/kg。
　　6、與對照組相比，染毒組家兔體重基本呈現(xiàn)增加趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　7、電鏡結(jié)果顯示染毒組家兔皮膚角質(zhì)層有不同程

6、度的改變，1.30mg/kg亞砷酸鈉染毒家兔皮膚出現(xiàn)角化層。8、0.13mg/kg、0.26mg/kg亞砷酸鈉染毒家兔能使皮膚組織中Nrf2、K1和K10mRNA的表達上調(diào);0.65mg/kg、1.30mg/kg能使皮膚組織中Nrf2mRNA、K1mRNA和K10mRNA的表達下調(diào)，其中0.13mg/kg、1.30mg/kg染毒組與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1、亞砷酸鈉對HaCaT細胞具有

7、雙向調(diào)節(jié)作用，1.30μmol/L亞砷酸鈉能促進細胞增殖、抑制細胞的凋亡，6.50μmol/L亞砷酸鈉染毒72h能抑制細胞增殖、促進細胞的凋亡。
　　2、亞砷酸鈉染毒能使HaCaT細胞中Nrf2、K1、K10 mRNA表達發(fā)生改變，1.30μmol/L亞砷酸鈉染毒能使基因表達上調(diào)，隨著染毒時間延長、染毒濃度增加能使基因表達逐漸下調(diào)。
　　3、亞砷酸鈉對HaCaT細胞的毒性作用受時間和濃度交互作用的影響，可推測砷暴露隨著染毒時