CXCR4對(duì)內(nèi)臟轉(zhuǎn)移乳腺癌預(yù)后及機(jī)制的研究.pdf

1、背景與目的：
　　乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。早期患者通過(guò)手術(shù)、化療、放療以及生物治療，預(yù)后較好。一旦發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，尤其內(nèi)臟轉(zhuǎn)移，預(yù)后往往較差。CXCR4已被證實(shí)在乳腺癌器官特性轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用。我們?cè)缙谘芯堪l(fā)現(xiàn)三陰性乳腺癌較其他類型的乳腺癌患者高表達(dá)CXCR4，并且更容易發(fā)生內(nèi)臟轉(zhuǎn)移。但對(duì)于已發(fā)生內(nèi)臟轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者是否高表達(dá)CXCR4，CXCR4表達(dá)情況對(duì)其預(yù)后是否有影響，目前尚未有報(bào)導(dǎo)。因此本研究的目的是：第一，

2、研究CXCR4對(duì)乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。第二，探索CXCR4影響乳腺癌生物學(xué)行為的機(jī)制。第三，明確內(nèi)臟轉(zhuǎn)移乳腺癌患者 CXCR4表達(dá)情況以及與預(yù)后（DFS：治療或手術(shù)至發(fā)生內(nèi)臟轉(zhuǎn)移的時(shí)間、OS1：發(fā)生內(nèi)臟轉(zhuǎn)移至死亡或末次隨訪的時(shí)間、OS：治療或手術(shù)后至死亡或末次隨訪的時(shí)間）的關(guān)系。
　　材料和方法：
　　1.利用shRNA干擾技術(shù)降低MDA-MB-231細(xì)胞中CXCR4的表達(dá)，體外通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)、克隆形成實(shí)驗(yàn)、侵襲實(shí)驗(yàn)檢

3、測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)能力、克隆形成能力、侵襲能力的改變。動(dòng)物模型進(jìn)一步研究CXCR4對(duì)乳腺癌荷瘤鼠內(nèi)臟轉(zhuǎn)移的影響。
　　2.通過(guò)Western blot技術(shù)和免疫組化技術(shù)檢測(cè)干擾CXCR4后MDA-MB-231細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT)相關(guān)指標(biāo)(E-cadherin, MMP-9, Vimentin)的變化。
　　3.原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)（TUNEL，TdT-mediated dUTP nick end labeling）檢測(cè)干擾C

4、XCR4后MDA-MB-231細(xì)胞凋亡指數(shù)（AI）的變化。
　　4.收集內(nèi)臟轉(zhuǎn)移乳腺癌患者臨床資料和腫瘤組織蠟塊，通過(guò)免疫組化方法檢測(cè)其腫瘤組織的CXCR4表達(dá)水平。分析CXCR4表達(dá)水平與內(nèi)臟轉(zhuǎn)移乳腺癌患者臨床特征及預(yù)后的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1.體外實(shí)驗(yàn)證明干擾 CXCR4后，MDA-MB-231的增殖能力明顯下降，克隆形成能力降低37％(p=0.002)，侵襲能力降低68.5%(p<0.0001)。
　　

5、2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明干擾CXCR4后，MDA-MB-231細(xì)胞的成瘤率降低60%，肺轉(zhuǎn)移能力下降30%。
　　3. Western blot和免疫組化結(jié)果均顯示干擾 CXCR4后， MDA-MB-231細(xì)胞的E-cadherin表達(dá)水平明顯升高，同時(shí)MMP-9，Vimentin的表達(dá)明顯下降。
　　4.凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示干擾CXCR4后，MDA-MB-231細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯升高（35.67%±13%vs.5.58%±5.3%, p

6、=0.053）。
　　5.出現(xiàn)內(nèi)臟轉(zhuǎn)移乳腺癌患者CXCR4陽(yáng)性率為51.5%。高表達(dá)CXCR4的患者多同時(shí)合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（p=0.004），無(wú)疾病生存期更短（p=0.001），總生存期也更短（p=0.021），但對(duì)于轉(zhuǎn)移后患者的生存時(shí)間沒(méi)有影響（p=0.708)。單因素分析和多因素分析結(jié)果均顯示，CXCR4高表達(dá)是無(wú)疾病生存期的獨(dú)立影響因素（p<0.0001)。對(duì)于總生存期，單因素分析結(jié)果顯示， CXCR4高表達(dá)是其獨(dú)立的影響因素

7、（p=0.021)，但多因素分析結(jié)果未顯示 CXCR4高表達(dá)對(duì)總生存期有顯著影響（p=0.094)。無(wú)論是單因素分析，還是多因素分析，CXCR4表達(dá)情況未影響患者發(fā)生內(nèi)臟轉(zhuǎn)移以后的生存期（p=0.708)。
　　結(jié)論：
　　干擾CXCR4后，乳腺癌腫瘤細(xì)胞通過(guò)抑制上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機(jī)制降低細(xì)胞的增殖，侵襲和轉(zhuǎn)移能力。對(duì)內(nèi)臟轉(zhuǎn)移患者來(lái)說(shuō)，CXCR4高表達(dá)患者無(wú)疾病生存期和總生存期更短，但對(duì)于發(fā)生內(nèi)臟轉(zhuǎn)移后患者的生存期