聚β-羥基丁酸酯高產(chǎn)菌株的選育及發(fā)酵和提取工藝研究.pdf

1、聚β-羥基丁酸酯（PHB）是微生物在營(yíng)養(yǎng)失衡的條件下貯存的內(nèi)源性高分子聚合物，除具有與化學(xué)合成塑料相似的性質(zhì)外，還具有生物相容性和生物可降解性，故可作為生物可降解塑料的原料。在“白色污染”日益嚴(yán)重的今天，由微生物發(fā)酵法生產(chǎn)PHB成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。
　　通過(guò)尼羅藍(lán)平板熒光法，結(jié)合蘇丹黑染色法，從污水中初篩到PHB產(chǎn)生菌。搖瓶發(fā)酵復(fù)篩，13號(hào)菌產(chǎn)PHB能力較強(qiáng)，PHB產(chǎn)量為0.57g/L，將其作為進(jìn)一步研究的出發(fā)菌株。
　　

2、對(duì)13號(hào)菌株的細(xì)胞形態(tài)、培養(yǎng)特征、生理生化特征以及對(duì)各種碳源和氮源的利用情況進(jìn)行了研究，根據(jù)《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》初步鑒定菌株為動(dòng)膠菌屬（Zoogloea itzigohn），將其命名為Z-13。
　　對(duì)Z-13進(jìn)行紫外誘變育種：紫外燈功率12W，垂直照射距離10cm，照射時(shí)間110s。在產(chǎn)PHB能力顯著提高的突變菌中，14號(hào)菌遺傳穩(wěn)定性最佳，命名為uZ-14。uZ-14的PHB產(chǎn)量為0.78g/L，比誘變前提高了36.84％，將其

3、作為發(fā)酵條件研究的菌株。
　　對(duì)uZ-14產(chǎn)PHB發(fā)酵培養(yǎng)條件優(yōu)化結(jié)果表明，最佳碳源為葡萄糖，最佳氮源為硫酸銨。最佳發(fā)酵培養(yǎng)基（g/L）：葡萄糖10， MgSO4·7H2O0.2， K2HPO41.5， Na2HPO4·12H2O1.8，(NH4)2SO40.2，CaCl2·2H2O0.01，微量元素溶液1ml。最佳發(fā)酵條件為：裝液量30ml/250ml三角瓶， pH7.2，30℃，接種量3%，150r/min振蕩培養(yǎng)48h，PH

4、B產(chǎn)量達(dá)到1.08g/L，比優(yōu)化前提高38.46%。
　　對(duì)發(fā)酵后菌體的PHB提取方法進(jìn)行了研究， SDS/NaClO-氯仿提取 PHB效果最佳，菌體干重/SDS溶液（w/v）1%，30℃處理20min（SDS溶液濃度4g/L），離心取沉淀，加入與SDS溶液相同體積的NaClO溶液（活性氯濃度為2.84%，pH為12），30℃處理20min，離心取沉淀，氯仿抽提后 PHB含量可達(dá)40.25%，分子量為1206205，在獲得較高的P