固定免疫分子的新方法及其傳感性能的研究.pdf

1、電化學(xué)免疫傳感器是將免疫反應(yīng)的特異性與電化學(xué)方法的高靈敏度相結(jié)合的分析器件，具有操作簡單、響應(yīng)速度快、靈敏度高、價格低廉等優(yōu)點，在食品工業(yè)、臨床診斷和環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域已展現(xiàn)出十分廣泛的應(yīng)用前景。然而，在免疫傳感器的研究與應(yīng)用中仍存在著諸多亟待解決的問題，如生物活性材料(抗體或抗原)的有效固定，更好的保持其生物活性，降低甚至消除抗體在傳感器上的非特異性吸附，提高傳感器的再生性能等等。其中將抗體穩(wěn)定的、高活性的固定在基體電極表面，構(gòu)成生物敏感

2、膜是制備電化學(xué)免疫傳感器的關(guān)鍵技術(shù)之一。本文以石墨和金電極為基礎(chǔ)電極，分別運用電聚合、電沉積、自組裝和納米技術(shù)研究抗體的固定化方法，制備了三種免疫傳感器，并對抗體的固定化過程進(jìn)行了電化學(xué)表征。這些傳感器制備簡單、操作方便、檢測下限低、線性范圍寬、可對游離抗原進(jìn)行快速檢測。本論文工作主要包括以下幾個方面：
　　 1.基于聚鄰苯二胺和納米金的電位型免疫傳感器
　　 分別利用電聚合技術(shù)、電沉積技術(shù)將鄰苯二胺、納米金依次固定在石

3、墨電極上，進(jìn)而通過納米金對蛋白質(zhì)的強烈吸附作用，將抗體固定在石墨電極表面，制備出抗體/金納米粒子/聚鄰苯二胺/石墨免疫傳感器(Ab/GNPs/PoPD/CE)。該傳感器對抗原(小鼠IgG)的檢測下限為1.0×10-3ng/mL，線性范圍為4.0×10-3～1.0×103 ng/mL，響應(yīng)時間短(10 min以內(nèi))，同時具有較好的重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和選擇性。
　　 2.基于4-BDT與NPQD混合SAM的電位型免疫傳感器
　　

4、 首先在金電極表面制備4-ATP自組裝單分子膜(4-ATPSAM)，得到4-ATPSAM/Au電極，在0.1 mol/L PBS(pH7.40)溶液中對4-ATP SAM/Au電極進(jìn)行循環(huán)伏安掃描，使金表面上4-ATP SAM中的4-ATP單體發(fā)生聚合，生成4-巰基-N-苯基苯醌二亞胺(NPQD)，在金電極表面上空出4-巰基苯硫酚(4-BDT)的結(jié)合位點，進(jìn)而可將4-BDT組裝在NPQD膜的空隙中，制備4-BDT、NPQD混合SAM，使

5、4-BDT分子直立在金表面，得到的毓基(-SH)化表面與金納米粒子(GNPs)作用，構(gòu)筑一種具有生物兼容活性的納米金界面，進(jìn)而通過納米金對蛋白質(zhì)的較強吸附作用將抗體(羊抗小鼠IgG)固定于修飾電極表面，從而制備了抗體/金納米粒子/對巰基苯硫酚+4-巰基-N-苯基苯醌二亞胺混合SAM/金電極免疫傳感器(Ab/GNPs/4-BDT+NPQD MSAM/Au)。該傳感器具有靈敏度高、響應(yīng)速度快，其檢測下限為2.0×10-4 ng/mL，線性范

6、圍為2.0×10-3～1.0×103ng/mL，而且能夠再生，重復(fù)使用壽命長達(dá)10天左右。
　　 3.基于蛋白A定向固定抗體的電位型免疫傳感器
　　 利用蛋白A(Pro-A)對抗體具有定向固定的作用，并結(jié)合自組裝技術(shù)在金電極表面自組裝4-ATP形成自組裝單層膜(4-ATP SAM)，利用4-ATP的氨基官能團與蛋白A之間靜電吸附作用在4-ATP單層膜上組裝蛋白A，通過蛋白A對抗體的親和力將羊抗小鼠IgG抗體定向的固定在修