高溫菜籽粕蛋白的提取分離純化及酶法改性的研究.pdf

1、本文對(duì)纖維素酶輔助提取菜籽蛋白和堿液提取菜籽蛋白進(jìn)行研究,優(yōu)化了酶解工藝和堿提工藝；采用酸沉和超濾對(duì)菜籽蛋白進(jìn)行分離回收,對(duì)酸沉工藝和超濾工藝進(jìn)行了研究；通過離子交換層析進(jìn)一步純化菜籽蛋白,對(duì)純化后蛋白的組分作SDS-PAGE電泳分析,并對(duì)酶解后菜籽蛋白功能特性的變化進(jìn)行研究。
　　 用纖維素酶對(duì)菜籽粕進(jìn)行酶解處理,再在pH9.0的條件下進(jìn)行水相提取。采用正交試驗(yàn)對(duì)酶解工藝進(jìn)行優(yōu)化,得到的最佳參數(shù)為:溫度為55℃,pH為5.0,

2、酶解時(shí)間2.5 h,纖維素酶添加量為0.3％。研究結(jié)果表明,在未經(jīng)酶解處理的條件下,菜籽蛋白提取率為28.07％；經(jīng)過纖維素酶解處理后,菜籽蛋白提取率為42.34％,提取率提高了50.83％。
　　 在堿液提取菜籽蛋白過程中,在單因素試驗(yàn)和Plackett-Burman試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,采用響應(yīng)曲面法(RSM)對(duì)影響菜籽蛋白提取的三個(gè)顯著性因素pH、提取溫度和提取次數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化,得到最佳提取工藝為pH13,溫度49.19℃,提取3次

3、,此時(shí)蛋白提取率為89.82％。
　　 酸沉的最佳工藝條件確定為pH4.5,此時(shí)蛋白沉降率達(dá)到53.46％；用正交試驗(yàn)對(duì)酸沉后得到的上清液的超濾工藝進(jìn)行優(yōu)化,最佳超濾工藝為壓力0.15 MPa、pH9.0、溫度40℃,在此條件下蛋白截留率達(dá)到69.87％。經(jīng)噴霧干燥得到的菜籽分離蛋白的蛋白純度為76.58％,蛋白最終得率為68.76％。
　　 采用陰離子交換層析對(duì)菜籽分離蛋白進(jìn)一步純化,對(duì)純化后的蛋白進(jìn)行SDS-PAGE

4、電泳分析,結(jié)果顯示菜籽分離蛋白主要有5種蛋白組分,分子量依次為28KD、24KD、22KD、19KD、17KD。
　　 用酸性蛋白酶對(duì)菜籽分離蛋白進(jìn)行水解,水解的條件為:加酶量20 U/g,pH3.0,溫度40℃,水解時(shí)間2.5 h,此時(shí)蛋白水解度在10％左右。對(duì)酶解前后蛋白的功能特性的變化進(jìn)行研究,并用大豆蛋白作對(duì)照。結(jié)果顯示,酶解后菜籽蛋白的溶解性、起泡性發(fā)生顯著變化,其溶解度增大了67.84％,起泡能力增大了57.14％,