具有立體選擇性環(huán)氧化物水解酶產(chǎn)生菌的篩選及手性β受體阻滯劑的生物法制備.pdf

1、在環(huán)氧化物水解酶產(chǎn)生菌的篩選過程中，本文主要以間甲基苯基縮水甘油醚為底物，以高效液相為分析方法，獲得一株具有高活力、高對映立體選擇性的環(huán)氧化物水解酶產(chǎn)生菌。經(jīng)過鑒定為巨大芽孢桿菌命名為Bacillus megaterium ZJUZQ-002。
　　 對Bacillus megaterium ZJUZQ-002進行發(fā)酵條件優(yōu)化。發(fā)現(xiàn)菌株生長過程中pH值和溫度對菌體的產(chǎn)量與環(huán)氧化物水解酶活力有重要影響。當發(fā)酵pH值為7.2左右，溫

2、度為30℃時，菌體產(chǎn)量與酶活力均較好。底物誘導對該菌的酶活力也有重要的影響，當?shù)孜镎T導量為6mmol/L時，所得菌的酶活力最好，當?shù)孜镎T導的濃度高于12 mmol/L時該菌基本不生長。
　　 該菌產(chǎn)生環(huán)氧化物水解酶的最佳發(fā)酵條件為：蔗糖1.0％，酵母膏1.0％，NaCl1.0％，MgSO4·7H2O5 mmol/L，K2HPO4·3H2O0.3％，KH2PO40.1％，底物6 mmol/L，溫度：30℃，pH7.2；250 mL

3、三角瓶裝30 mL，轉(zhuǎn)速200 r/min，時間30 h。在該條件下酶活可達58.5 U/L。
　　 對Bacillus megaterium ZJUZQ-002進行拆分條件，包括溫度、緩沖液pH、助溶劑類型、時間及催化劑與底物的質(zhì)量比等進行研究，并確定其最佳的拆分條件。緩沖液為pH8.0、濃度為0.1 M的磷酸鉀（PKB），轉(zhuǎn)化溫度30℃，轉(zhuǎn)化時間16 h，助溶劑為DMSO，凍干細胞/底物（g/g）=9/1，底物濃度為20 m

4、mol/L；在該條件下底物的e.e。值為99.9％，其E值為37。
　　 對底物特異性的研究，發(fā)現(xiàn)菌體對鄰位和間位有甲基取代基的苯基縮水甘油醚類底物有較好的對映立體選擇性，并催化水解（R）-型的環(huán)氧化物，保留（S）-型；而對于對位有甲基取代基的苯基縮水甘油醚類底物立體選擇性稍差，且主要催化水解（S）-型的環(huán)氧化物，保留（R）-型；通過Docking研究已解釋了這一現(xiàn)象。
　　 在最適的轉(zhuǎn)化條件下，對反應體系進行了擴大化轉(zhuǎn)