可溶性環(huán)氧化物水解酶抑制劑對(duì)脂肪細(xì)胞介導(dǎo)膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)的影響.pdf

1、目的：
　　 用高膽固醇飲食喂養(yǎng)apoE-/-小鼠建立動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)模型，觀察可溶性環(huán)氧化物水解酶抑制劑(solubleepoxide hydrolase inhibitor, sEHi)-trans-4-[4-(3-adamantan-1-ylureido)-cyclohexyloxy]-benzoic acid(t-AUCB)對(duì)動(dòng)脈粥樣斑塊面積的影響及機(jī)制;并觀察t-AUCB對(duì)脂肪細(xì)胞介

2、導(dǎo)膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)(reversecholesterol transport，RCT)的影響;同時(shí)觀察不同濃度t-AUCB處理組小鼠血清介導(dǎo)的脂肪細(xì)胞膽固醇流出的影響。本研究有利于闡明t-AUCB抗AS的可能機(jī)制，并加深對(duì)t-AUCB抗AS的了解，為臨床治療提供新的思路。
　　 方法：
　　 36只雄性8周齡apoE-/-小鼠隨機(jī)分為正常飲食組，高膽固醇飲食組和t-AUCB組。高膽固醇飲食組小鼠予以標(biāo)準(zhǔn)高膽固醇飲食8w，t-

3、AUCB組小鼠在高膽固醇飲食8w的基礎(chǔ)上分別加用不同濃度的t-AUCB(0，5，15，50mg/L)再喂養(yǎng)1w。對(duì)小鼠整個(gè)主動(dòng)脈進(jìn)行蘇丹Ⅲ和HE染色，觀察各組小鼠主動(dòng)脈斑塊形成及變化情況。分別給各組小鼠腹腔注射經(jīng)3H-膽固醇處理過的脂肪細(xì)胞懸液(細(xì)胞數(shù)達(dá)2.5×106個(gè)/M1)單獨(dú)籠養(yǎng)48h后收集血清、肝臟、膽汁和糞便。液體閃爍計(jì)數(shù)儀分別檢測血清、肝臟、膽汁和糞便中3H-膽固醇的放射活性，并計(jì)算其占腹腔注射總量的百分比。前脂肪細(xì)胞3T3

4、-L1與1μCi/mL3H-膽固醇共同孵育24h后標(biāo)記脂肪細(xì)胞，以不同濃度t-AUCB處理組小鼠血清作為脂肪細(xì)胞膽固醇流出的接受體，液體閃爍計(jì)數(shù)儀檢測脂肪細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞上清液中3H-膽固醇的放射活性并計(jì)算膽固醇流出率。實(shí)時(shí)熒光定量多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Realtime-PCR)測定肝臟三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)子A1(ATP-binding cassette transporter A1，ABCAl)、清道夫受體BI（Scavenger recept

5、or class B Type1，SR-BI）、三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)子G5(ATP-binding cassette transporter G5，ABCG5)和三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)子G8(ATP-binding cassette transporter G8，ABCG8)mRNA的表達(dá);免疫印跡法(Western Blot)測定脂肪細(xì)胞ABCA1、SR-BI、ABCG5和ABCG8蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.

6、正常飲食組和高膽固醇飲食組小鼠主動(dòng)脈動(dòng)脈粥樣斑塊面積占總血管面積的百分比分別為(25.48±1.86)％，(76.32±5.08)％。與正常飲食組相比，高膽固醇飲食組小鼠主動(dòng)脈粥樣斑塊面積明顯增大，有顯著性差異(P＜0.05); t-AUCB0、5、15、50mg/L組小鼠主動(dòng)脈動(dòng)脈粥樣斑塊面積占總血管面積的百分比分別為(76.32±5.08)％、(66.7±3.37)％、(48.56±0.77)％、(36.74±1.64)％。 t-A

7、UCB0mg/L組相比，t-AUCB5、15、50mg/L可呈濃度依賴性縮小小鼠主動(dòng)脈粥樣斑塊面積，有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 2.與正常飲食組相比，高膽固醇飲食組小鼠血清、肝臟、膽汁和糞便3H-膽固醇放射活性降低的百分比分別為45％，4.7％，60.8％，57.4％;與t-AUCB0mg/L相比，t-AUCB5、15、50mg/L呈濃度依賴性升高血清3H-膽固醇放射活性的百分比分別為81％、135％和197％;升高肝

8、臟3H-膽固醇放射活性的百分比分別為38.46％、138％和141％;升高膽汁3H-膽固醇放射活性的百分比分別為155％、178％和233％;升高糞便3H-膽固醇放射活性的百分比分別為65％、161％和226％;
　　 3.正常飲食組和高膽固醇飲食組小鼠血清介導(dǎo)的膽固醇流出率分別為（8.20±0.88）％，（6.39±1.11）％。與正常飲食組相比，高膽固醇飲食組小鼠血清介導(dǎo)的膽固醇流出率降低，達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);與

9、t-AUCB0mg/L組相比，t-AUCB5、15、50mg/L組小鼠血清介導(dǎo)的脂肪細(xì)胞膽固醇流出率呈濃度依賴性增加，分別為（6.39±1.11）％，(8.18±0.34)％，(9.22±1.22)％，(10.81±0.71)％，均達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 4.與正常飲食組相比，高膽固醇飲食組肝臟和小腸組織ABCG5和ABCG8 mRNA和蛋白的表達(dá)增強(qiáng)，達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);與t-AUCB0mg/L組相

10、比，t-AUCB5、15、50mg/L組呈濃度依賴性降低肝臟組織ABCA(l) mRNA和蛋白的表達(dá)，并呈濃度依賴性升高肝臟和小腸組織ABCG5和ABCG8mRNA和蛋白的表達(dá)，均達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，t-AUCB對(duì)肝臟SR-BI mRNA和蛋白的表達(dá)無影響(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.高膽固醇飲食可增加小鼠主動(dòng)脈粥樣斑塊面積，而t-AUCB可劑量依賴性降低高膽固醇飲食小鼠主動(dòng)脈粥樣斑塊面積。

11、>　　 2.高膽固醇飲食降低小鼠體內(nèi)脂肪細(xì)胞介導(dǎo)膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)的效率，而t-AUCB升高高膽固醇飲食小鼠體內(nèi)脂肪細(xì)胞介導(dǎo)的膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)的效率。
　　 3.高膽固醇飲食組小鼠血清介導(dǎo)的脂肪細(xì)胞膽固醇流出率降低;而t-AUCB可呈濃度依賴性升高高膽固醇飲食組小鼠血清介導(dǎo)的脂肪細(xì)胞膽固醇流出率。
　　 4.t-AUCB升高高膽固醇飲食小鼠體內(nèi)脂肪細(xì)胞介導(dǎo)的膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)的效率可能與升高小鼠血清介導(dǎo)的脂肪細(xì)胞膽固醇流出，降低小鼠肝