酵母表達鮭魚降鈣素結腸定位緩釋膠囊的制備及藥動學研究.pdf

1、降鈣素(CT)是由32個氨基酸組成的一種多肽類激素。在不同種屬來源的降鈣素中，以鮭魚降鈣素活性最高，它通過抑制破骨細胞的活性，減少骨鈣丟失，從而降低血鈣含量，同時具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。但由于其相對分子質量小，容易被胃腸道內存在的大量多肽及蛋白質水解酶降解，還有胃腸道內的低PH值環(huán)境和肝臟的首關效應，導致鮭魚降鈣素口服給藥的生物利用度較低(一般小于10％)。因此，為了提高鮭魚降鈣素的生物利用度，本研究采用亞微粒載藥體系和結腸定位的原理，以天

2、然聚合物作為藥物載體，聯(lián)合應用生物黏附劑等材料，以促進鮭魚降鈣素的口服吸收。
　　 本實驗以重組鮭魚降鈣素酵母為原料，以β-環(huán)糊精、阿拉伯膠為壁材，羥丙甲纖維素和卡波姆為生物黏附劑，通過噴霧干燥法制備了重組鮭魚降鈣素酵母微球，并以市售的結腸溶空心膠囊為定位載體，將其制成每顆膠囊50mg，12h緩釋的結腸定位膠囊。使藥物與結腸黏膜表面直接接觸，提高局部濃度，同時增加藥物與結腸的接觸時間，提高生物利用度，降低毒副作用。
　　

3、 在實驗過程中，首先建立了酵母表達鮭魚降鈣素結腸定位緩釋微球膠囊的體外分析方法。在處方因素中，重點考察了壁材的種類及用量、生物黏附劑的比例以及芯材比例等對膠囊體外釋放的影響，最終得到緩釋膠囊的最佳處方；在對工藝的考察中，首先通過單因素實驗，考察了噴霧干燥進風溫度、出風溫度、進料速度、霧化壓力等因素對膠囊體外釋放的影響，得出適宜的操作范圍；在此基礎上，設計了正交實驗，通過對正交實驗結果的分析，得出了最佳的噴霧條件：進風溫度160℃、進料速

4、度10mL·min-1、霧化壓力0.5MPa。在此條件下，所得膠囊能達到緩釋12 h的試驗設計要求，并且確定了符合設計要求的重組鮭魚降鈣素酵母緩釋膠囊的最佳處方和制備工藝。此外，采用優(yōu)化條件制備了三批樣品，以檢驗處方和工藝的重現(xiàn)性并對膠囊進行了初步穩(wěn)定性實驗。考察了轉籃速度、粒徑大小等對膠囊中藥物釋放的影響。
　　 本文采用Tsuruoka法制備高鈣血大鼠模型，觀察給藥后血漿鈣濃度的變化。隨機分組單劑量給藥試驗設計單劑量口服重組

5、鮭魚降鈣素酵母緩釋膠囊0.5g·kg-1和肌肉注射密鈣息(Miacalcic，Mia)100 IU·kg-2進行了藥物代謝動力學研究，酶聯(lián)免疫吸附法測定各時間點血藥濃度，DAS2.0藥動學軟件計算出相應的藥動學參數(shù)，t檢驗比較兩種制劑的藥動學參數(shù)。結果表明，ρο重組鮭魚降鈣素酵母緩釋膠囊0.5，1g·kg-1，iv帕米磷酸二鈉(pamidronate，Pam)5 mg·kg-1，im Mia100/IU·kg-1均有明顯降低血漿鈣濃度的

6、作用，經配對t檢驗，三者藥后1h的血鈣變化率差異無顯著性。四參數(shù)回歸方程為：OD=-7E-07C3+0.0003C2+0.0073C-0.0761(r=0.9985)，檢測范圍為5-200μg·L-1，最低檢測限為5μg·L-1，日內和日間RSD小于8.60％，單劑量口服重組鮭魚降鈣素酵母緩釋膠囊、肌肉注射Mia，Tmax分別為(3.01±0.57)，(0.99±0.30)h；Cmax為(107.25±20.03)，(131.83±26

7、.96)μg·L-1；T1/2α為(2.30±0.38)，(0.07±0.22)h；T1/2β為(3.85±0.68)，(2.50±0.51)h；Ka為(0.42±0.23)，(14.26±0.21)h-1；AUC0-t為(800.72±131.36)，(601.29±112.02)μg·h·L-1；AU0-∞為(861.31±158.65)，(617.06±130.27)μg·h·L-1；MRT0-t為(5.46±1.071)，(4.