雙酶固定化技術(shù)制備玉米活性肽研究.pdf

1、酶固定化技術(shù)使酶分子與載體材料多點(diǎn)連接，可有效避免酶變形及自溶現(xiàn)象，從而顯著提高穩(wěn)定性。采用復(fù)合載體進(jìn)行雙酶固定化不僅能彌補(bǔ)單一載體的不足，還能利用雙酶的優(yōu)勢提高酶解效率。為了研究固定化雙蛋白酶制備活性肽技術(shù)，提高酶解效率，本文對復(fù)合載體固定化雙蛋白酶(Double proteases immobilized within alginate-chitosan，ACDP)和雙蛋白酶聚集體(Crosslinked enzyme aggreg

2、ates，CLEAs)的性質(zhì)和應(yīng)用進(jìn)行了系列研究。
　　首先，在復(fù)合載體固定化雙酶(ACDP)制備玉米活性肽（Corn Peptides，CPs）方面，研究了利用堿性蛋白酶和胰蛋白酶，以海藻酸鈉-殼聚糖為復(fù)合載體，以玉米醇溶蛋白（zein）為底物制備玉米活性肽CPs。探究了傳統(tǒng)方法與ACDP方法對zein的降解效果，確定了ACDP的最佳制備工藝,對zein降解水解度比傳統(tǒng)方法更高；對酶解物玉米粗肽進(jìn)行了分離純化得到五個(gè)不同分子量分

3、布范圍的CPs組分（F1：>6 kDa，F(xiàn)2：4 kDa-6 kDa，F(xiàn)3：<4 kDa，CPs-1，CPs-2），對五種CPs組分進(jìn)行抗氧化活性及降血壓活性分析，結(jié)果表明分子量范圍分布越小，抗氧化及降血壓活性越好?；钚噪慕M分CPs-1和CPs-2的DPPH自由基清除活性的IC50分別為0.47和0.23mg/mL；CPs-2具有79.34％的體外降血壓活性，灌胃10mg/kg的CPs-2的SHRs12 h后SBP下降44.6mm Hg

4、，DBP下降10.2mm Hg。因此，利用海藻酸鈉-殼聚糖復(fù)合載體固定化雙酶技術(shù)可制備具有良好生物活性的玉米肽。
　　其次，在交聯(lián)雙蛋白酶聚集體(CLEAs)方面，本文將中性蛋白酶和木瓜蛋白酶在沉淀劑乙醇的作用下沉淀，并采用戊二醛進(jìn)一步將雙蛋白酶進(jìn)行交聯(lián)，制備得到中性蛋白酶-木瓜蛋白酶聚集體。確定了最佳沉淀劑乙醇，雙酶液/戊二醛為1/5，最佳交聯(lián)時(shí)間為4h，所得酶聚集體較游離態(tài)蛋白酶穩(wěn)定性高，適用于水溶性黃豆、綠豆、紅豆和黑豆蛋白