酶法制備牡蠣活性肽及其誘導(dǎo)Hela細胞凋亡的研究.pdf

1、目的：酶法制備牡蠣活性肽并探討其誘導(dǎo)人宮頸癌Hela細胞凋亡的作用及機制。
　　方法：
　?。?）采用響應(yīng)面法優(yōu)化了復(fù)合酶水解牡蠣蛋白的工藝。
　?。?）在溫度45℃、pH8.0的條件下，通過探討底物濃度及酶濃度對水解度的影響，建立酶解牡蠣蛋白的動力學模型。
　?。?）采用Sephadex G-25柱層析法對酶解液中的牡蠣活性肽進行分離純化，并通過Trcince-SDS-PAGE電泳和凝膠過濾層析法測定其相對分子

2、質(zhì)量大小。
　?。?）以SRB（Sulfordmaine B磺基羅丹明B）比色法，臺盼藍計數(shù)法，Hochest/PI雙熒光染色法和DNA Ladder等技術(shù)方法檢測BPO（Bioactive peptides of oyster）誘導(dǎo)Hela細胞凋亡的方式，并采用流式細胞術(shù)和實時定量PCR（RT-PCR）從分子水平上分析了BPO誘導(dǎo)Hela細胞凋亡的作用機制。
　　結(jié)果：
　?。?）牡蠣蛋白的最佳酶解工藝為：溫度45℃

3、、復(fù)合酶濃度2g/L、底物濃度15.3g/L、復(fù)合酶比（風味蛋白酶與胰蛋白酶活力比）為2.3：1；
　　（2）復(fù)合蛋白酶在溫度45℃、pH8.0的條件下，水解牡蠣蛋白的動力學方程及參數(shù)為：水解速率模型R=（40.301E0-0.4257S0）exp（-0.2176DH）和水解度動力學模型DH=4.5956ln[1+（8.7695E0/S0-0.09263）t]，動力學失活常數(shù)Kd=8.5378min-1和米氏常數(shù)Km=3.741m