有機(jī)磷除草劑莎稗磷酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的研究.pdf

1、分類號(hào)：TS201密級(jí)：(秘密、機(jī)密、絕密)學(xué)校代碼：10057研究生學(xué)號(hào)：09808035有機(jī)磷除草劑莎稗磷酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的研究DevelopmentofaDirectCompetitiveEnzymeLinkedImmunosorbentAssayfortheRapidDetectionofAnilofosResidues專業(yè)名稱：食品科學(xué)指導(dǎo)教師：張燕教授研究生姓名：高愛華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：工學(xué)碩士論文提交日期：2011年12月論文

2、課題來(lái)源：“十一五”科技支撐項(xiàng)目學(xué)位授予單位：天津科技大學(xué)摘要除草劑莎稗磷的潛在危害性已經(jīng)引起了人們的關(guān)注，因此建立農(nóng)產(chǎn)品及環(huán)境中莎稗磷殘留的快速檢測(cè)方法具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。本論文首次建立了一種能準(zhǔn)確、快速檢測(cè)莎稗磷的酶聯(lián)免疫檢測(cè)分析方法，可適用于農(nóng)產(chǎn)品和環(huán)境中莎稗磷殘留的高通量快速定量檢測(cè)。根據(jù)莎稗磷的結(jié)構(gòu)特征，設(shè)計(jì)合成了莎稗磷半抗原，半抗原偶聯(lián)牛血清白蛋白(BSA)后免疫新西蘭大耳兔得到了高特異性(100gg／L莎稗磷抑制率達(dá)到59

3、76％)的多克隆抗血清，效價(jià)達(dá)1：160000?？寡褰?jīng)ProteinASepharose4B親和層析柱純化后用于分析方法的建立。通過(guò)對(duì)抗體包被濃度、酶標(biāo)抗原稀釋倍數(shù)、封閉液種類、競(jìng)爭(zhēng)時(shí)間、競(jìng)爭(zhēng)溫度、樣品稀釋液種類及pH、離子強(qiáng)度等一系列實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化，建立了一種能快速有效的檢測(cè)莎稗磷殘留的直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析方法。該方法檢出限ICl5為01土0009gg／L，靈敏度IC50為10士005gg／L，特異性強(qiáng)，與其結(jié)構(gòu)類似物無(wú)交叉反應(yīng)。此

4、外，該方法具有良好的穩(wěn)定性，板內(nèi)和板問(wèn)變異系數(shù)皆15％。選擇水、土壤及不同谷物樣品進(jìn)行了基質(zhì)影I自JN除研究，水樣可稀釋后直接進(jìn)行測(cè)定，土壤、谷物樣品經(jīng)兩倍提取后再經(jīng)PBST適當(dāng)稀釋即可消除基質(zhì)影響。樣品的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)中，平均回收率在81O％1169％之問(wèn)，變異系數(shù)9％，表明了該方法的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。運(yùn)用氣相色譜法對(duì)建立的莎稗磷直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析方法進(jìn)行了驗(yàn)證。經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，兩種方法檢測(cè)結(jié)果具有較高的一致性，R2達(dá)09795。進(jìn)一步將該