2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、基因治療需要解決的首要問(wèn)題是開(kāi)發(fā)安全、高效的基因載體。殼聚糖(CS)作為基因載體具有生物相容性好、安全性高等優(yōu)點(diǎn),但不經(jīng)改性修飾的CS基因轉(zhuǎn)運(yùn)效率低;而CS的改性修飾又因其在非水介質(zhì)中的難溶性,受到諸多限制。1-丁基-3-甲基咪唑醋酸鹽([BMIM]Ac)離子液體可以溶解CS,解決了制備新型殼聚糖衍生物的溶解性限制難題,并有利于促進(jìn)反應(yīng)進(jìn)行、提高取代度。本論文采用[BMIM]Ac溶劑,合成了殼聚糖接枝聚乙烯亞胺(PEI)、殼聚糖接枝單甲

2、氧基聚乙二醇胺(mPEG-NH2)和PEI、雙重刺激響應(yīng)殼聚糖接枝mPEG-NH2和PEI衍生物,并研究了它們的基因轉(zhuǎn)運(yùn)性能。
  以羰基二咪唑(CDI)為選擇性活化試劑,[BMIM]Ac為均相溶劑,通過(guò)兩步親核取代反應(yīng)對(duì)CS進(jìn)行PEI高效接枝,得到一系列CS-g-PEI-x脲類接枝聚合物,反應(yīng)速度快、產(chǎn)物取代度高。采用FTIR、1HNMR、13C-CP/MAS NMR、GPC等手段對(duì)產(chǎn)物結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征。酸堿滴定、瓊脂糖凝膠電泳和

3、激光粒度儀測(cè)試結(jié)果表明,隨著PEI接枝率的增加,CS-g-PEI-x對(duì)DNA的延滯能力和壓縮能力增強(qiáng)。在Hep-2細(xì)胞中的基因轉(zhuǎn)運(yùn)結(jié)果表明,PEI接枝率為4.5%時(shí),CS-g-PEI具有最佳的基因轉(zhuǎn)運(yùn)效率和較低的細(xì)胞毒性。
  采用上述方法,以mPEG-NH2和PEI對(duì)CS進(jìn)行修飾,得到CS-g-mPEG-g-PEI-x接枝聚合物。FTIR、1HNMR、UV、GPC等測(cè)試結(jié)果表明,mPEG-NH2和PEI接枝到CS分子鏈上。酸堿滴

4、定和瓊脂糖凝膠電泳表明,PEI接枝率接近時(shí),提高mPEG-NH2接枝率對(duì)質(zhì)子緩沖能力影響不顯著,但DNA延滯能力減弱。氮磷比(N/P)為6的CS-g-mPEG-g-PEI-x/DNA復(fù)合物能夠有效抵抗0.10μg/μL肝素鈉和2.0U核酸酶的破壞。10%血清條件下Hep-2細(xì)胞中的基因轉(zhuǎn)運(yùn)結(jié)果表明,CS-g-mPEG-g-PEI聚合物細(xì)胞毒性低,mPEG-NH2接枝率為2.9%時(shí)基因轉(zhuǎn)運(yùn)效率最好。
  從殼寡糖出發(fā),合成了酸敏感酰

5、腙鍵和還原敏感二硫鍵交聯(lián)雙重刺激響應(yīng)殼聚糖(SRCS);采用前述方法,對(duì)SRCS進(jìn)行mPEG-NH2和PEI共價(jià)接枝修飾,得到SRCS-g-mPEG-g-PEI聚合物。利用1HNMR、13C-CP/MAS NMR、FTIR、UV和GPC等手段對(duì)產(chǎn)物結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征。SRCS-g-mPEG-g-PEI能夠有效壓縮DNA,形成的復(fù)合物(N/P≥10)在0.10μg/μL肝素鈉、2.0 U核酸酶及25%血清中能夠穩(wěn)定存在,在pH=5.0的酸環(huán)境

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