異檸檬酸裂解酶肽類抑制劑篩選及合成.pdf

1、當(dāng)今，結(jié)核病(TB)依然侵害人們健康。因為多藥耐藥(MDR)與普遍抗藥性(XDR)結(jié)核桿菌的產(chǎn)生，使結(jié)核病在世界范圍內(nèi)產(chǎn)生越來越難以治愈的現(xiàn)象。分枝桿菌持續(xù)感染和耐藥分枝桿菌的產(chǎn)生和擴(kuò)散，是當(dāng)今結(jié)核病研究應(yīng)對的兩大困難，迫切需要研發(fā)新型抗結(jié)核藥物。異檸檬酸裂解酶(isocitrate lyase，ICL)是分枝桿菌利用乙醛酸循環(huán)途徑中得到能量的一個重要限速酶，對結(jié)核桿菌維持其持留狀態(tài)起決定性作用，因此我們選擇以異檸檬酸裂解酶(ICL)作

2、為研究新型抗結(jié)核藥物的靶點。
　　通過噬菌體的肽庫篩選并合成具有抑制ICL活性的多肽。又以ICL的三維晶體結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)，利用Discovery Studio2.1中l(wèi)igentfit模塊，將篩選出的多肽與優(yōu)化后的ICL蛋白晶體進(jìn)行分子對接。用Fmoc固相的合成方法合成能夠成功對接的多肽，并進(jìn)行生物活性檢測。結(jié)果利用噬菌體肽庫的篩選得到了6條的七肽成功和ICL蛋白的晶體對接。合成后的6條七肽質(zhì)譜檢測結(jié)果均正確，6條七肽的分子量分別為9

3、17、746、848、796、658、776。利用超微量分光光度計對6條七肽進(jìn)行體外生物活性監(jiān)測，其對ICL酶的活性均明顯具有抑制的作用，抑制率分別為75％、64％、66％、77％、78％、67％。其中3條七肽抑制率超過了70％。通過Discovery Studio2.1中Binding Site Analysis模塊，對ICL晶體結(jié)構(gòu)分析，首次發(fā)現(xiàn)ICL四聚體中央部分另存在一個較大空洞，其能結(jié)合配體成為新的抑制位點。
　　本研究