絹絲昆蟲柳蠶異檸檬酸脫氫酶基因的克隆及序列分析.pdf

1、異檸檬酸脫氫酶（isocitrate dehydrogenase，IDH）是生物中一種重要的有脫羧作用的氧化還原酶，在生物中有NAD-依賴型的異檸檬酸脫氫酶和NADP-依賴型的異檸檬酸脫氫酶兩種形式。異檸檬酸脫氫酶不僅在氨基酸和維生素合成、能量代謝中扮演重要角色，而且在三羧酸循環(huán)和乙醛酸旁路的碳通量分配中起關(guān)鍵性調(diào)控作用，因此異檸檬酸脫氫酶是國際上公認的研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能、酶的催化與調(diào)節(jié)機制、代謝途徑最好模型之一。
　　 近期

2、對IDH的研究很多，包括：NADP-IDH的生物學(xué)特性中的底物及輔酶專一性，金屬離子的影響，最適pH、最適溫度及熱穩(wěn)定性，化學(xué)修飾劑等以及NADP-IDH的空間結(jié)構(gòu)特點，NADP-IDH的調(diào)節(jié)、催化等作用機制。這些研究為我們更清楚的認識其在生物體代謝和功能等方面的作用提供了較好的理論依據(jù)。
　　 到目前為止，人，小鼠，斑馬魚，果蠅，惡性瘧原蟲，家蠶，大豆等的NADP-異檸檬酸脫氫酶序列已進行了解析，它們的異檸檬酸脫氫酶具有一定的

3、同源性，為了弄清柳蠶異檸檬酸脫氫酶序列的特性及其與其它物種的關(guān)系，從而能夠更加系統(tǒng)的研究異檸檬酸脫氫酶的特點，更好地開發(fā)利用柳蠶資源，根據(jù)已報道的NADP-異檸檬酸脫氫酶基因的保守性序列設(shè)計引物，從柳蠶蛹脂肪體中提取RNA，并反轉(zhuǎn)錄成cDNA為模板進行基因克隆、測序。獲得的柳蠶NADP依賴性異檸檬酸脫氫酶序列全長1317bp，編碼439個氨基酸，含有異檸檬酸脫氫酶保守性結(jié)構(gòu)，與家蠶異檸檬酸脫氫酶的氨基酸序列同源性達95％，這也從另一方面