重組人白細(xì)胞介素-1α(rhIL-1α)的畢赤酵母表達(dá)及生物學(xué)作用研究.pdf

1、人白細(xì)胞介素-1α(hIL-1α)在抗腫瘤等方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。目前，重組hIL-1α(rhIL-1α)表達(dá)主要是通過(guò)大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)，但大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)存在蛋白分離純化工藝復(fù)雜等缺點(diǎn)。
　　酵母表達(dá)系統(tǒng)具有蛋白表達(dá)后修飾及分離純化工藝簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，本文構(gòu)建了rhIL-1α畢赤酵母工程菌，挑選表達(dá)量高的菌株，在1L搖瓶和3L發(fā)酵罐規(guī)模下進(jìn)行了表達(dá)條件的優(yōu)化，在10L和50 L發(fā)酵罐規(guī)模進(jìn)行了樣品的獲取、產(chǎn)物純化工藝以及初步的活性

2、研究。為rhIL-1α的產(chǎn)業(yè)化研究奠定了基礎(chǔ)。主要研究包括:
　　1、本研究對(duì)hIL-1α的cDNA序列進(jìn)行設(shè)計(jì)和優(yōu)化，采用pPICZαA作為目的基因的表達(dá)載體，通過(guò)電轉(zhuǎn)化法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至X-33畢赤酵母。通過(guò)基因組PCR鑒定，MM和MD平板篩選，SDS-PAGE鑒定等方法篩選得到高表達(dá)且遺傳穩(wěn)定的rhIL-1α工程菌。
　　2、在1L搖瓶規(guī)模下對(duì)rhIL-1α工程菌的發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明，在pH5.5、26℃、甲醇

3、濃度0.25％條件下，rhIL-1α的表達(dá)量最高(19 mg/L)。
　　3、在3L發(fā)酵罐規(guī)模下對(duì)rhIL-1α工程菌的發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明，在pH5.5、26℃、甲醇濃度0.25％條件下，rhIL-1α的表達(dá)量最高(180 mg/L)。
　　4、擴(kuò)大發(fā)酵規(guī)模獲取樣品。在pH5.5、26℃、甲醇濃度0.25％條件下，10L和50L發(fā)酵罐中的表達(dá)量分為251 mg/L和307 mg/L。
　　5、對(duì)rhIL-1α的