DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶活性檢測(cè)及其抑制劑篩選的電化學(xué)生物傳感方法研究.pdf

1、目的：
　　DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)的一種重要表現(xiàn)形式,它是通過(guò)DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶催化甲基從供體上轉(zhuǎn)移到目標(biāo)核酸上這一反應(yīng)來(lái)完成的，甲基化轉(zhuǎn)移酶在這一過(guò)程中起到了非常重要的作用，它的量和活性直接影響DNA甲基化的水平。DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶的異常表達(dá)已經(jīng)在多種腫瘤細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)。DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑在抗生素和抗癌治療方面均有應(yīng)用潛力。本研究的目的在于，利用納米材料的優(yōu)良性能，制備特異靈敏的電化學(xué)生物傳感器，用于DNA甲基化和DNA甲

2、基化轉(zhuǎn)移酶活性檢測(cè)，并對(duì)DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑的抑制效果進(jìn)行分析。
　　方法：
　　1.DNA S3-AuNPs生物復(fù)合物的制備：先制備穩(wěn)定的AuNPs，利用DNA S3與AuNPs之間形成的穩(wěn)固的Au-S鍵將兩者結(jié)合在一起，并用TEM和UV-vis方法進(jìn)行表征。
　　2.電化學(xué)生物傳感器的制備：依次對(duì)預(yù)處理后的金電極修飾DNAS1、MCH、BSA、DNA S2、DNAS3-AuNPs，并對(duì)每一步修飾結(jié)果用電化學(xué)方法

3、進(jìn)行表征。
　　3.優(yōu)化電化學(xué)生物傳感器的重要實(shí)驗(yàn)條件：甲基供體SAM的濃度、限制性核酸內(nèi)切酶Mbo I的濃度。
　　4.考察電化學(xué)生物傳感器性能：可行性、特異性、線性范圍、最低檢測(cè)限、對(duì)抑制劑抑制效果的分析、精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性等。
　　結(jié)果：
　　1.對(duì)制備所得的AuNPs和DNA S3-AuNPs進(jìn)行形態(tài)學(xué)和光譜學(xué)分析，在TEM中可見(jiàn)AuNPs呈球狀，均勻分散，DNA S3-AuNPs與AuNPs幾乎無(wú)區(qū)

4、別；在UV-vis曲線中可見(jiàn)DNA S3-AuNPs的吸收峰比AuNPs的吸收峰紅移了5 nm，表明DNA S3-AuNPs制備成功。
　　2.對(duì)電化學(xué)生物傳感器的每一步修飾結(jié)果用電化學(xué)方法進(jìn)行表征，CV與EIS共同表明電極的每一步修飾都是成功可靠的。
　　3.重要實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化：SAM最佳濃度為80μM，Mbo I最佳濃度為50 U/mL。
　　4.電化學(xué)生物傳感器各項(xiàng)性能：可用于靈敏特異地檢測(cè)Dam MTase，并

5、能對(duì)其抑制劑5-氟尿嘧啶進(jìn)行檢測(cè)分析；線性范圍是0.075-30 U/mL；最低檢測(cè)限是0.02 U/mL；精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性均良好。
　　結(jié)論：
　　本研究表明，該電化學(xué)生物傳感器可以用于對(duì)Dam MTase進(jìn)行特異靈敏的檢測(cè)分析，檢測(cè)線性范圍是0.075-30 U/mL，最低檢測(cè)限是0.02 U/mL；還可以對(duì)Dam MTase抑制劑5-氟尿嘧啶進(jìn)行檢測(cè)分析。本方案具有一定的通用性，只要改變相應(yīng)的DNA序列，形成不同