2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩58頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領

文檔簡介

1、DNA甲基化在人類基因組中表觀遺傳修飾和在基因的調(diào)控中起重要作用。在異常的甲基化中,甲基轉(zhuǎn)移酶將S-腺苷甲硫氨酸(SAM)的甲基轉(zhuǎn)移到CpG島上胞嘧啶的C5位置上。CpG島中基因啟動子區(qū)域異常甲基化是新一代癌癥生物標志物,因此,對于快速檢測DNA甲基化和轉(zhuǎn)移酶活性可以為早期癌癥診斷提供一種有效的方法。然而,傳統(tǒng)分析檢測甲基轉(zhuǎn)移酶的方法具有耗時、費用高以及靈敏度不高等缺點。所以,迫切需要發(fā)展新方法,實現(xiàn)快速、簡單、靈敏檢測甲基轉(zhuǎn)移酶活性,

2、同時檢測CpG島的甲基位點可以用于確定特定的癌癥類型。為抗癌藥物發(fā)展和癌癥診斷提供了理論基礎。本文研究內(nèi)容主要包括以下兩個方面:
 ?。?)基于酶輔助雙信號放大的電化學方法高靈敏檢測 Dam甲基轉(zhuǎn)移酶活性。首先,通過DNA雜交作用將二茂鐵-DNA(S2)組裝到巰基-DNA(S1)修飾電極表面,產(chǎn)生二茂鐵的良好電化學信號。Dam甲基轉(zhuǎn)移酶能將S-腺苷甲硫氨酸(SAM)上的甲基轉(zhuǎn)移到發(fā)夾DNA的腺嘌呤的N6位置上,進而限制性內(nèi)切酶Dp

3、n I將發(fā)生甲基化的發(fā)夾DNA在甲基化位點剪切,釋放出單鏈DNA(S3)。將制備的巰基-DNA(S1)和二茂鐵-DNA(S2)修飾金電極探針浸泡在以上溶液中,釋放出的S3與修飾金電極雙鏈探針中的S2凸出的部分雜交形成新的雙鏈DNA。經(jīng)核酸外切酶III作用,能夠從新形成的雙鏈DNA的S2的3′端進行剪切,導致二茂鐵脫離電極表面。釋放出的S3繼續(xù)與修飾金電極雙鏈探針中的S2凸出的部分雜交形成新的雙鏈DNA而進入下一個剪切放大循環(huán),多次循環(huán),

4、使得S2標記的二茂鐵大量脫離電極表面導致二茂鐵的電流強度下降,同時電極表面的大量巰基化單鏈S1被釋放出來,將電極浸泡在含有血紅素和鉀離子的溶液中,形成的G-四鏈體-血紅素復合物。電化學測量結(jié)果表明,由于二茂鐵脫離電極表面而電流降低,電極表面的單鏈 S1與血紅素形成G-四鏈體-血紅素復合物而電流增強,通過二者電流強度之比即可實現(xiàn)Dam甲基轉(zhuǎn)移酶的靈敏檢測。本方法的優(yōu)點如下:(1)對Dam甲基轉(zhuǎn)移酶的檢測限能夠達到4.8×10-3 U mL

5、-1,靈敏度遠遠高于其他檢測方法;(2)對Dam甲基轉(zhuǎn)移酶識別的特異性強,其他的甲基轉(zhuǎn)移酶,如M.SssI甲基轉(zhuǎn)移酶,不干擾測定,所以,本方法的選擇性高;(3)可用于Dam甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑的篩選,結(jié)果表明絲裂霉素、順氯氨鉑對Dam甲基轉(zhuǎn)移酶沒有影響,而青霉素和5-氟尿嘧啶對Dam甲基轉(zhuǎn)移酶的活性有明顯抑制效果,其中5-氟尿嘧啶對Dam甲基轉(zhuǎn)移酶抑制效果最強。
 ?。?)建立了一種基于 SAM和金納米粒子的生物硫醇免標記比色檢測法。

6、SAM包含一個高能的手性硫離子,該硫離子分別與甲基、無碳糖、以及甲硫氨酸連接。硫帶有孤對電子,五碳糖上含有一個高電負性的氧,能夠使硫原子的孤對電子轉(zhuǎn)移到氧原子上,從而使得SAM分子帶正電;而檸檬酸三鈉還原合成的金納米粒子表面帶負電。當 SAM與金納米粒子混合,SAM可以中和金納米粒子表面的電荷,導致金納米粒子之間的排斥力減小,從而使得金納米粒子發(fā)生團聚,金納米粒子溶液的顏色由紅色變成藍色。由于生物硫醇含巰基官能團,能夠通過金硫鍵作用阻礙

7、SAM誘導金納米粒子的團聚,因此當生物硫醇存在時,金納米粒子溶液顏色不變。據(jù)此,建立了生物硫醇的比色檢測方法。此外,在檢測生物硫醇的過程中,金納米粒子溶液顏色的變化還能夠通過裸眼觀察到,因此可以實現(xiàn)生物硫醇的可視化檢測。在最佳的實驗條件下,半胱氨酸、谷胱甘肽和高半胱氨酸檢測的線性范圍分別為0.4-1.2μM、0.2-0.9μM和0.6-3.0μM;檢測限分別為35.8 nM、21.7 nM和62.4 nM。與其他比色法相比,本方法的靈敏

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論