采后番茄寄生菌的分離、鑒定及E-2-己烯醛的抑菌機(jī)理研究.pdf

1、本研究從采后腐爛番茄表面分離、純化獲得番茄的寄生菌，并對其進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定和生理生化特性的研究。利用GC-MS技術(shù)分析番茄不同時期葉片中揮發(fā)性物質(zhì)的主要成分，并測定了番茄葉片揮發(fā)性物質(zhì)合成途徑的關(guān)鍵性酶脂肪氧合酶（LOX），苯丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（PAL）的酶活。GC-MS分析得知，揮發(fā)性物質(zhì)中的主要成分中有E-2-己烯醛，利用其對番茄寄生菌進(jìn)行抑菌研究，并通過一系列實(shí)驗(yàn)探討可能的抑菌機(jī)理。最后，研究E-2-己烯醛對儲存期番茄感染病菌的抑制情

2、況及番茄品質(zhì)的影響。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴從成熟腐爛的番茄表面分離、純化獲得一株寄生菌：圓弧青霉。利用掃描電鏡對其進(jìn)行形態(tài)特征觀察、生理生化特性分析。最后，提取其rDNA，根據(jù)保守序列ITS設(shè)計(jì)引物并進(jìn)行PCR擴(kuò)增,所得產(chǎn)物送上海生工測序，序列經(jīng)NCBI序列比對分析，得知其為圓弧青霉。選用其作為研究材料，根據(jù)生理生化特性分析，得知其最適生長溫度為25℃，pH值為5時，菌落長勢旺盛，孢子的致死溫度為70℃。⑵通過頂空固相微萃取

3、法收集品種“A57”番茄營養(yǎng)生長期的葉片揮發(fā)性物質(zhì)，并通過GC和GC-MS技術(shù)對其揮發(fā)性物質(zhì)組分進(jìn)行分析。結(jié)果表明，番茄葉片中主要揮發(fā)性成分以醛類物質(zhì)含量為最多，達(dá)到47.41％，烯萜類物質(zhì)含量也很高，所占比例為46.51%，其它物質(zhì)含量都很少，包括烷烴類，酮類，醇類等。同時分別采集二葉期，十葉期，開花期的“A57”，“克萊斯頓”，“中蔬5號”番茄品種的葉片，測定其影響揮發(fā)性物質(zhì)的關(guān)鍵性酶LOX，PAL的酶活性。⑶ 經(jīng)GC-MS技術(shù)分析

4、，發(fā)現(xiàn)E-2-己烯醛是所有揮發(fā)性物質(zhì)中含量最高的成分之一。初步抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，E-2-己烯醛具有明顯的抑菌效果，E-2-己烯醛的MIC（最低抑菌濃度）為160μl/L，MFC（最低殺菌濃度）為320μl/L。經(jīng)掃描電鏡觀察，發(fā)現(xiàn)的菌絲及分子孢子的形態(tài)發(fā)生了很大改變。核酸泄漏的結(jié)果顯示，在MFC濃度時，細(xì)胞內(nèi)溶物大量釋放，而對照組的OD值幾乎未發(fā)生變化。E-2-己烯醛處理后的真菌培養(yǎng)液電導(dǎo)率和pH值測定結(jié)果顯示，MIC濃度時，電導(dǎo)率從開

5、始的85.3μs/cm到120min的115.1μs/cm，MFC濃度處理的菌液電導(dǎo)率由開始的99.1μs/cm增至128.4μs/cm，120min時，濃度為MIC，MFC的E-2-己烯醛處理的pH分別為6.74和6.41，明顯的低于對照組（7.13）。經(jīng)原子吸收分光光度計(jì)測定，K+離子的含量隨處理時間的延長而呈現(xiàn)出明顯的上升趨勢。120min時對照組的鉀離子濃度為2.40mg/L， MIC濃度下，鉀離子的濃度為2.56mg/L，當(dāng)濃

6、度為MFC時，測得的鉀離子的濃度為2.76mg/L。實(shí)驗(yàn)表明，經(jīng)E-2-己烯醛120min處理，對脂質(zhì)含量進(jìn)行測定，MIC濃度下，與對照組相比，減幅為26.9mg/g，而MFC濃度下，同一時間段，其減幅達(dá)43.8mg/g。⑷選取大小均一，無損傷，品種為―中蘇5號的番茄進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，研究E-2-己烯醛對圓弧青霉感染的抑制效果，5d后統(tǒng)計(jì)番茄果實(shí)的感染率情況。從整體上講， E-2-己烯醛的抑菌效果隨抑菌濃度的升高越明顯，當(dāng)其濃度為1280μl/

7、L時，明顯的抑制了番茄的發(fā)病率。E-2-己烯醛對番茄品質(zhì)的影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在儲存期320μl/L的E-2-己烯醛處理后可溶性固形物（TSS）、可滴定酸（TA）的下降速度和對照組相比，有所變緩，處理第5天時，TSS的含量差異較大，9d后，對照組，實(shí)驗(yàn)組分別為3.2%，3.1%，變化幅度不大。而TA含量在貯藏第9天時，對照組番茄由最初0.517%下降至0.382%，320μg/mL E-2-己烯醛處理后番茄中TA下降至0.392%（P＜