水腫病、水腫病康復仔豬源乳酸菌的分離鑒定及其抑菌機理的研究.pdf

1、為了開發(fā)適用于豬的益生素，進一步明晰乳酸菌對仔豬特定腸道致病菌的作用機制，本研究從水腫病、水腫病康復仔豬小腸黏膜上分離鑒定出11株乳酸菌，并對其生長曲線、產(chǎn)酸、抑菌、胃腸道因素耐受等特性進行了研究，最后篩選出1株生長速度快，其它性能也較好的乳酸菌.整個實驗分為四部分： 第一部分：試驗選取泰州市飼養(yǎng)戶同窩水腫病發(fā)病仔豬(6周齡)進行飼養(yǎng)，于水腫病發(fā)病仔豬病死后屠宰2頭病死豬，并同時屠宰2頭同窩水腫病康復仔豬.從水腫病病死豬腸系膜淋

2、巴結(jié)分離并鑒定得到一株致斷奶仔豬水腫病大腸桿菌0138；從水腫病、水腫病康復仔豬十二指腸、空腸腸黏膜分離到11株乳酸菌，均為革蘭氏陽性.11株菌中有4株菌生長速度、產(chǎn)酸明顯快于其它菌株(p<0.05)，編號為L1、L2、L3、LA.將這4株乳酸菌分別進行菌種鑒定，得出L1為小鼠乳桿菌；L2為耐酸乳桿菌；L3為類似腸乳桿菌；L4基本與鼠李糖乳桿菌相同。 第二部分：研究了模擬胃腸環(huán)境因素即低pH值、膽鹽、胃蛋白酶對乳桿菌L1、L2、

3、L3、L4存活能力的影響，以及這4株乳酸菌的耐熱特性.結(jié)果表明，L2、L3菌株對低pH值的耐受性較好，在pH值為2.0時，能夠存活3h，而L1和L4兩菌株對低pH值的耐受性較差，在pH值為2.0時，僅能夠存活0.5 h；隨著pH值的升高，L1、L2、L3和L44菌株的存活率亦提高.以不舍膽鹽處理組為對照，膽鹽濃度為0.08％時，L1、L2存活數(shù)由109降為108，L3的存活數(shù)由1010降為109，L4的存活數(shù)由108降為107；膽鹽濃度

4、為0.4％時，L1、L2存活數(shù)由109降為103，L3的存活數(shù)由1010降為108，L4的存活數(shù)由108降為107.在1％蛋白酶濃度下，L1、L2、L3和L44菌株的生長繁殖未受任何影響.以37℃處理20min為對照，50℃熱處理對L1、L2、L3和L44菌株的存活無影響，65℃以上能顯著影響L1、L2、L3和L44菌株存活數(shù)，80℃處理后L4已檢測不到活菌，但L1、L3在80℃處理后仍有104的存活數(shù)。 第三部分：用體外厭氧發(fā)

5、酵技術(shù)對實驗一中從水腫病、水腫病康復仔豬十二指腸、空腸腸黏膜分離到的4株乳酸菌的產(chǎn)酸能力進行比較，并對其抑菌特性及其產(chǎn)生的抑菌物質(zhì)的部分理化特性進行研究，結(jié)果表明：L3菌株產(chǎn)乳酸的速度最快，終末發(fā)酵液中乳酸含量最高，為60.48 mmol.L-1，pH值下降速度最快，終末pH值達到最低，為3.70.在抑菌實驗中，L3對致斷奶仔豬水腫病大腸桿菌0138，腸致病性豬大腸桿菌( K88、K99、987p)的抑制作用顯著高于其它菌株(P<0.0

6、5)；在低pH值條件下4株菌抑菌效果顯著；排除酸后的結(jié)果表明，抑菌作用仍然保持90％以上，說明L3菌株的抑菌作用主要來自于產(chǎn)生的乳酸；抑菌物質(zhì)具有熱穩(wěn)定性，經(jīng)熱處理后仍保有95％以上的抑菌效果；抑菌物質(zhì)對蛋白酶不敏感，蛋白酶處理后仍保持90％以上的抑菌效果。 第四部分：研究了一株分離自斷奶仔豬小腸黏膜的腸乳桿菌L3體外發(fā)酵特性，及其代謝產(chǎn)物對病原性大腸桿菌K88，0138存活的影響.體外發(fā)酵結(jié)果表明：12小時，L3菌液pH值迅速