廣東部分地區(qū)犬流感血清流行病學(xué)調(diào)查及病毒的分離鑒定.pdf

1、犬流感是由犬流感病毒(Canine influenza virus，CIV)引起的一種高度接觸性、傳染性呼吸道疾病。已經(jīng)證實(shí)有馬源H3N8和禽源H3N2亞型流感病毒可以造成犬的感染，并引起犬的種內(nèi)傳播。犬與人類接觸密切，目前尚不清楚流感病毒是否可以通過犬傳染給人。因此，對犬流感的流行病學(xué)調(diào)查扣病毒的監(jiān)測具有重要公共衛(wèi)生意義。
　　研究利用血凝抑制試驗(yàn)對來源于廣東省的309份犬血清樣本進(jìn)行H3亞型流感病毒抗體檢測，總體陽性率為26.

2、21％。對不同類型、不同區(qū)域的犬抗體陽性率進(jìn)行比較，結(jié)果顯示寵物犬、農(nóng)家犬及流浪犬的抗體陽性率分別為34.02％、9.09％和25.93％，個別地區(qū)的陽性率超過50％。說明H3亞型犬流感已在犬群中流行，并且與近年的調(diào)查結(jié)果相比呈上升趨勢。
　　采集廣東地區(qū)29份有呼吸道癥狀犬的鼻拭子，接種雞胚分離病毒，并進(jìn)行亞型鑒定和序列分析。分離獲得2株H3N2亞型犬流感病毒，分別命名為A/canine/Guangdong/12/2012(H3

3、N2)及A/canine/Guangdong/23/2012(H3N2)。根據(jù)參考毒株的基因序列設(shè)計(jì)特異性引物，用RT-PCR的方法分別擴(kuò)增兩株病毒的8個基因片段，克隆入pMD-19T載體進(jìn)行基因測序，并構(gòu)建基因進(jìn)化樹。結(jié)果顯示分離病毒的8個片段與韓國禽源犬、貓流感毒株、泰國分離株以及廣東、江蘇、北京、浙江、遼寧分離株的基因同源性均較高，達(dá)到98％-99％，與泰國2012年分離株在演化關(guān)系上最為接近。氨基酸比對顯示HA的裂解位點(diǎn)、抗原位

4、點(diǎn)、受體結(jié)合位點(diǎn)及潛在糖基化位點(diǎn)與禽源株相比均有突變。NA抗原位點(diǎn)也有突變，并在頸部有氨基酸插入。其中分離株A/canine/Guangdong/12/2012(H3N2)較獨(dú)特，頸部只有一個氨基酸插入，與以往犬流感病毒中國分離株不同。
　　為了建立針對多種亞型犬流感病毒的檢測方法，選取犬流感病毒中保守的核蛋白(NP)基因，克隆至pET-32a載體，在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)，然后進(jìn)行SDS-PAGE和Western-blot分析。結(jié)果