江蘇部分地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型分子流行病學(xué)調(diào)查及其致病性研究.pdf

1、豬圓環(huán)病毒(Porcine circovirus，PCV)屬于圓環(huán)病毒科(Circoviridae)圓環(huán)病毒屬(Circovirus)，的DNA病毒，其核酸分子為單股、首尾閉合的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，無(wú)囊膜。PCV目前有兩個(gè)基因型PCV1和PCV2。PCV2又可分為5個(gè)亞型PCV2a、PCV2b、PCV2c、PCV2d、和PCV2e。PCV2本身不致死豬，但可造成免疫抑制。PCV2是斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)的主要病原，當(dāng)與其它病原混合感

2、染時(shí)，可加重病豬的死亡，給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大的損失。
　　近些年來(lái)，豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)的基因亞型持續(xù)發(fā)生演變，讓流行形勢(shì)變得復(fù)雜。本文通過(guò)采集江蘇部分地區(qū)病死豬的病料及揚(yáng)州某規(guī)?；涝讏?chǎng)樣品，利用PCR方法對(duì)六種?？砂l(fā)生混合感染的病毒即豬圓環(huán)病毒Ⅰ型(Porcine circovirus type1，PCV1)、豬圓環(huán)病毒Ⅱ型(Porcine circovirus type2，PCV2)、偽狂犬病毒(Porcine pseud

3、orabies virus，PRV)、豬細(xì)小病毒(Porcine parvovirus，PPV)、豬瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV)和豬藍(lán)耳病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)檢測(cè)為PCV2陽(yáng)性的病料用Dulac細(xì)胞進(jìn)行病毒的分離純化和毒力測(cè)定。對(duì)部分純化的毒株測(cè)序并作遺傳進(jìn)化分析，為該病的流行及變

4、異情況提供相關(guān)的數(shù)據(jù)。另外，挑選部分分離株作人工感染實(shí)驗(yàn)可更好地研究該病毒的致病機(jī)理，為疫苗研究打下基礎(chǔ)。
　　研究1.2015-2016年江蘇部分地區(qū)PCV2及幾種常見(jiàn)病原的流行病學(xué)調(diào)查
　　2015～2016年間在江蘇部分地區(qū)共采集575份病死豬淋巴結(jié)組織檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，46份病料為PCV1陽(yáng)性;287份病料為PCV2陽(yáng)性;133份病料為PPV陽(yáng)性;80份病料為PRV陽(yáng)性;34份病料為PRRSV陽(yáng)性;39份病料為CSFV陽(yáng)性;

5、PCV1、PCV2、PPV、PRV、PRRSV、CSFV陽(yáng)性率分別為8％、50％、23％、14％、6％和7％:其中在混合感染中，以PCV2和PPV的混合感染率最高，有70份，占總數(shù)的17.5％;PCV2和PCV1的混合感染有46份，占總數(shù)的11.5％;PCV2和PRV的混合感染有35份，占總數(shù)的8.7％。
　　為了監(jiān)測(cè)江蘇部分地區(qū)PCV2的流行特點(diǎn)，在2015～2016年間采集病死豬病料用PCR技術(shù)檢測(cè)PCV2病毒核酸，對(duì)檢測(cè)為陽(yáng)

6、性的樣品進(jìn)行病毒分離和測(cè)序，共測(cè)得28株P(guān)CV2病毒全基因組，繪制遺傳進(jìn)化樹(shù)。，全長(zhǎng)為1767 bp的分離株有27株，1株為1766 bp。測(cè)得的毒株分屬于PCV2b和PCV2d兩個(gè)基因亞型，屬于PCV2b亞型有7株，屬于PCV2a亞型1株;其余為PCV2d亞型。對(duì)28株P(guān)CV2ORF2編碼氨基酸序列比對(duì)分析表明，PCV2基因型及亞型具有其特異的氨基酸變異位點(diǎn)。而2015-2016年間在江蘇部分地區(qū)的PCV2流行毒株主要為PCV2d亞型

7、。
　　研究2.豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)分離株致病性研究
　　為了解當(dāng)前流行的PCV2d毒株的致病性，從分離株中挑選151107 YZ株和160924 YC株作動(dòng)物致病性實(shí)驗(yàn)。首先，用本室的Dulac細(xì)胞對(duì)上述分離株分離并盲傳，讓病毒適應(yīng)細(xì)胞且達(dá)到較高滴度。取盲傳第3代、第7代、第10代的病毒液提取DNA用PCR檢測(cè)和測(cè)定TCID50可以發(fā)現(xiàn)隨著傳代次數(shù)的增加病毒滴度逐漸上升，并在10代左右達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)。將PCV2抗體陰性

8、豬隨機(jī)分為3組:健康對(duì)照組2頭;感染151107 YZ組3頭;感染160924 YC組3頭。接種后第3、7、10、14、17、21d采集血樣檢測(cè)PCV2的抗體和DNA水平;攻毒后21 d撲殺所有試驗(yàn)豬，并采集樣品制作病理切片。
　　結(jié)果表明:PCV2分離株可適應(yīng)Dulac細(xì)胞并可穩(wěn)定地增殖。IFA試驗(yàn)結(jié)果顯示，選取的兩個(gè)分離株TCID50值均可達(dá)到1060/mL以上。在人工感染試驗(yàn)中，試驗(yàn)組在攻毒后第7d均出現(xiàn)病毒血癥且PCV2的