腸炎沙門氏菌rpoS基因缺陷株的構(gòu)建及其特性研究.pdf

1、腸炎沙門氏菌（Salmonellaenteritidis，S.E.）是一種極易感染乳制品、肉類和魚類等食品的腸道致病菌，在生長(zhǎng)繁殖，食品加工及感染宿主等過程中，因應(yīng)答各種應(yīng)激環(huán)境而導(dǎo)致一種損傷亞致死狀態(tài)菌的存在，一段時(shí)間后恢復(fù)其生物活性，留下極大的食品安全隱患。由于有關(guān)S.E.的壓力應(yīng)答機(jī)制和損傷修復(fù)機(jī)理研究較少，難以檢測(cè)這種狀態(tài)的菌。S.E.應(yīng)答應(yīng)激條件時(shí)會(huì)啟動(dòng)相應(yīng)的調(diào)控因子調(diào)節(jié)一些基因的表達(dá)，以適應(yīng)新環(huán)境。sS因子就是這樣一種控制著

2、穩(wěn)定期與逆境脅迫相關(guān)的多種基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，但是其作用機(jī)制比較復(fù)雜。
　　本研究利用λ-Red同源重組技術(shù)構(gòu)建腸炎沙門氏菌rpoS基因定點(diǎn)缺陷株，考察了野生株與缺陷株在高溫、酸、高滲透壓及過氧化氫等應(yīng)激條件下的生存能力，同時(shí)比較兩者超高壓處理時(shí)的應(yīng)激應(yīng)答和損傷后的修復(fù)情況，初步研究了rpoS基因在脅迫環(huán)境下所發(fā)揮的作用及參與應(yīng)激應(yīng)答的調(diào)控情況，為深入了解sS因子應(yīng)激應(yīng)答的作用機(jī)制和S.E.的損傷修復(fù)機(jī)理奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果

3、如下：
　　1）利用λ-red同源重組系統(tǒng)成功敲除了腸炎沙門氏菌的rpoS基因，構(gòu)建了rpoS基因缺陷株—S.E./⊿rpoS菌株；
　　2）在LB培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)時(shí)，野生株和S.E./⊿rpoS菌株的生長(zhǎng)情況幾乎無顯著性差異（P>0.05）；在45℃、pH4.0、2%NaCl和1mMH2O2應(yīng)激環(huán)境下，S.E./⊿rpoS菌株的生存能力明顯比野生株要差，且兩者具有差異顯著性（P<0.05）。由此實(shí)驗(yàn)結(jié)果可初步說明在正常營養(yǎng)

4、條件下，rpoS基因缺失對(duì)腸炎沙門氏菌生存能力的影響不明顯，但是在S.E.應(yīng)對(duì)上述脅迫環(huán)境時(shí)，sS因子參與了相應(yīng)的應(yīng)答調(diào)控并發(fā)揮著重要的作用；
　　3）超高壓處理中，壓力因素是使S.E.損傷或致死的主要因素；比較野生株和S.E./⊿rpoS菌株的高壓應(yīng)激結(jié)果表明：sS因子在S.E.應(yīng)答高壓應(yīng)激時(shí)也可能參與調(diào)控并發(fā)揮作用；采用覆蓋法修復(fù)超高壓損傷菌時(shí)發(fā)現(xiàn)：野生株修復(fù)時(shí)間為2h，而S.E./⊿rpoS菌株的修復(fù)時(shí)間為5h，即野生株的修