水稻啟動子捕獲系統(tǒng)的建立.pdf

1、 本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了兩類分別基于T-DNA(GUS)和Ac/Ds(GUS)的捕獲質(zhì)粒。在上述基礎(chǔ)上，開展了下列幾方面的研究：一、利用綠色熒光蛋白基因(GFP)作為報(bào)告基因，構(gòu)建了基于T-DNA(GFP)的啟動子捕獲質(zhì)粒p13EGFP，轉(zhuǎn)化粳稻品種中花11的胚性愈傷組織，對所獲得的363棵獨(dú)立轉(zhuǎn)化株系的T0代進(jìn)行熒光共聚焦顯微鏡鏡檢，獲得5個GFP呈陽性的株系。將這5個株系繁種一代，經(jīng)潮霉素篩選獲得純合株系。二、基于Ac/Ds(GUS)的

2、捕獲質(zhì)粒p13B中引入了Bar基因(抗除草劑基因)，在轉(zhuǎn)基因植株中，當(dāng)Ds切離后Bar基因即可表達(dá)，用除草劑可以方便、快速地篩選Ds發(fā)生切離的植株。將此質(zhì)粒用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)化粳稻品種中花11的胚性愈傷組織，獲得了18個獨(dú)立轉(zhuǎn)化株系。對它們的T2代植株進(jìn)行了抗除草劑篩選，獲得141個抗除草劑轉(zhuǎn)基因植株。PCR分子檢測表明，其中37株是Ds因子發(fā)生了轉(zhuǎn)座、并可遺傳的植株。初步觀察到其中5株的GUS染色呈陽性。三、對質(zhì)粒p13GUS轉(zhuǎn)化粳