黃芩莖葉總黃酮對(duì)多發(fā)性硬化癥Th17-Treg細(xì)胞失衡影響的研究.pdf

1、目的：觀察實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（Experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)大鼠疾病嚴(yán)重程度和Th17、Treg細(xì)胞失衡的相關(guān)性，觀察黃苳莖葉總黃酮（Scutellaria baicalensis Stem-leaf Total Flavonoids, SSTF)對(duì) EAE大鼠病程發(fā)生發(fā)展及對(duì)Th17、Treg細(xì)胞的影響，初步探討黃芩莖葉總黃酮對(duì)多發(fā)性硬化癥（multiple scl

2、erosis, M S)的治療作用。
　　方法：構(gòu)建EAE大鼠動(dòng)物模型：豚鼠脊髓勻漿與完全弗氏佐劑（Complete Freund adjuvant, CFA)混在一起，于冰上反復(fù)抽打成油包水型乳劑作為免疫抗原。按0.5ml/只分別在大鼠四肢足墊和頸背部皮下注射免疫抗原，并在每只大鼠右后足背注射0.2m l的百日咳桿菌原液，誘導(dǎo)EAE模型。從免疫當(dāng)天開始，每日定時(shí)記錄大鼠的體質(zhì)量，同時(shí)觀察大鼠的臨床表現(xiàn)情況與神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分。將50

3、只W istar雌性大鼠隨機(jī)分為正常組（Normal)、模型組（EAE)、黃芩莖葉總黃酮高劑量組（SSTF-H)、黃芩莖葉總黃酮低劑量組（SSTF-L)和醋酸潑尼松組(Prednisone acetate)。其中，正常組和模型組自免疫當(dāng)日起給予生理鹽水1.5ml/只灌胃，1次/d，連續(xù)16d; SSTF高劑量組自免疫當(dāng)日以劑量200mg/kg灌胃，1次/d，連續(xù)16d; SSTF低劑量組自免疫當(dāng)日以劑量100mg/kg灌胃，1次/d，連

4、續(xù)16d;醋酸潑尼松組自免疫當(dāng)日以劑量6m g/kg灌胃，1次/d，連續(xù)16d。灌胃給藥16天后，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)大鼠外周血Th17、Treg細(xì)胞分布頻率；大鼠脊髓組織行H E染色和 L F B染色；免疫組化法檢測(cè)IL-17, TGF-P1和 Foxp3蛋白的水平；E L IS A法測(cè)定大鼠血清中IL-17、IL-23、TGF-P和 IL-10水平； RT-PCR測(cè)脊髓組織中IL-17A mRNA, TGF-P1mRNA和 Foxp3 m

5、RNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：與模型組大鼠相比，藥物治療組大鼠的發(fā)病平均潛伏期相對(duì)增加(P<0.05);與正常組相比，模型組的體質(zhì)量明顯下降，SSTF和醋酸潑尼松能改善E A E大鼠體質(zhì)量降低情況，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05);與模型組大鼠相比，治療組大鼠平均神經(jīng)功能評(píng)分降低（P＜0.05);與模型組大鼠相比，治療組大鼠外周血中Th17細(xì)胞比例明顯降低（P＜0.05)，而 Treg細(xì)胞比例相對(duì)升高（P＜0.05);HE染色結(jié)果顯

6、示，與模型組大鼠相比，治療組的炎性細(xì)胞浸潤減少，評(píng)分降低(P＜0.05); L F B染色結(jié)果顯示，與模型組大鼠比較，藥物治療組的病理學(xué)評(píng)分顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05);與模型組大鼠比較，治療組大鼠中IL-17蛋白的表達(dá)減少，而 TGF-P1與 Foxp3蛋白的表達(dá)增加，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與模型組大鼠相比，藥物治療組的血清中IL-17和 IL-23水平顯著降低(P＜0.05)，而 TGF-P和 IL-