創(chuàng)傷性異位骨化早期相關(guān)因子的研究.pdf

1、目的:
　　異位骨化是指軟組織中出現(xiàn)成熟骨組織的病理現(xiàn)象。根據(jù)其形成原因分為遺傳性和獲得性異位骨化，其中，以創(chuàng)傷性異位骨化最為多見(jiàn)。目前，隨著創(chuàng)傷（交通傷導(dǎo)致的高能量創(chuàng)傷以及人工關(guān)節(jié)置換的廣泛應(yīng)用等等）的不斷增加，異位骨化的發(fā)病率備受關(guān)注，一旦發(fā)生，將給患者帶來(lái)長(zhǎng)期的疼痛，關(guān)節(jié)活動(dòng)受限等癥狀，嚴(yán)重的降低了忠者的生活質(zhì)量。目前，臨床上常用的預(yù)防異位骨化的方式包括:非甾體類(lèi)抗炎藥及小劑量放射治療。但因其干擾骨折愈合過(guò)程，胃部刺激或潛在

2、的惡性腫瘤危險(xiǎn)等副作用，在臨床上使用受限。異位骨化有效治療方法是手術(shù)切除異位骨化的骨組織，但會(huì)給患者造成二次損傷。為進(jìn)一步降低異位骨化發(fā)生率，其分子機(jī)制及早期預(yù)防的研究具有重要意義。
　　本研究基于大鼠跟腱鉗夾、切斷模型誘導(dǎo)創(chuàng)傷性異位骨化，旨在了解創(chuàng)傷性異位骨化早期相關(guān)因子的表達(dá)情況，探討其在創(chuàng)傷性異位骨化發(fā)病機(jī)制中的作用及意義。
　　方法:
　　取8～10周齡雄性SD大鼠68只，體質(zhì)量(210.1±10.6)g，隨機(jī)

3、分為實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組(n-34)。實(shí)驗(yàn)組通過(guò)跟腱鉗夾、切斷法制備創(chuàng)傷性異位骨化模型，對(duì)照組僅暴露跟腱，跟腱不作任何處理。術(shù)后觀察兩組大鼠一般情況，于3、5、8及14天兩組各處死6只大鼠，取跟腱及周?chē)M織行大體及組織學(xué)染色觀察;同時(shí)對(duì)GEO數(shù)據(jù)庫(kù)中異位骨化相關(guān)因子表達(dá)譜及大量文獻(xiàn)進(jìn)行分析，篩選出25種相關(guān)因子。采用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)25種相關(guān)因子的基因表達(dá)情況，篩選出有統(tǒng)計(jì)學(xué)及臨床意義的因子，采用免疫組化等技術(shù)進(jìn)行驗(yàn)證。兩組剩

4、余10只大鼠于術(shù)后10周攝X線片，取跟腱及其周?chē)M織行組織學(xué)染色觀察，綜合評(píng)價(jià)異位骨化形成情況。
　　結(jié)果:
　　術(shù)后3天實(shí)驗(yàn)組1只大鼠死亡，其余大鼠均存活至實(shí)驗(yàn)完成。大體及組織學(xué)染色觀察示:各時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組大鼠跟腱及其周?chē)M織無(wú)明顯變化，呈正常跟腱結(jié)構(gòu);實(shí)驗(yàn)組大鼠跟腱斷端萎縮，壞死，有炎性細(xì)胞浸潤(rùn);隨時(shí)間延長(zhǎng)，其跟腱斷端出現(xiàn)硬結(jié)，其硬度不斷增加，有大量不規(guī)則結(jié)締組織及軟骨細(xì)胞。實(shí)時(shí)定量PCR數(shù)據(jù)顯示:與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組BM

5、P-1，TGF-β1，IL-1β，HIF-1α，MMP-2各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)均上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。BMP-4，GDF-8，TNF-α各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)均下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。免疫組化染色證實(shí)了BMP-1，TGF-β1，IL-1β，HIF-1α，MMP-2蛋白的存在。結(jié)合術(shù)后10周X線片及組織學(xué)觀察結(jié)果，實(shí)驗(yàn)組均發(fā)生異位骨化，對(duì)照組無(wú)異位骨化發(fā)生。
　　結(jié)論:
　　在大鼠跟腱創(chuàng)傷性異位骨化早期，BMP