不同葡萄糖濃度條件下茶多酚對(duì)NIT-1細(xì)胞內(nèi)活性氧干預(yù)的研究.pdf

1、目的：研究不同葡萄糖濃度對(duì)NIT-1細(xì)胞產(chǎn)生活性氧的影響，以及茶多酚對(duì)其的干預(yù)作用。
　　 方法：1、CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)茶多酚對(duì)NIT-1細(xì)胞增殖活性的影響。2、將NIT-1細(xì)胞置于低高兩種濃度葡萄糖培養(yǎng)以及高糖加用兩種濃度茶多酚干預(yù)的基礎(chǔ)上將其分組如下：NG組(葡萄糖5.6mmol/L培養(yǎng)48h)；HG組(葡萄糖25mmol/L培養(yǎng)48h)；HG1組(葡萄糖25mmol/L+1μg/ml茶多酚培養(yǎng)48h)；HG5組(葡萄糖25

2、mmol/L+5μg/ml茶多酚培養(yǎng)48h)。干預(yù)后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)ROS水平的改變一熒光探針(2'，7'-二氯熒光乙酰乙酸鹽，2',7'-dichlorofluorescein diacetate，DCFH-DA)染色。3、將NIT-1細(xì)胞置于不同濃度葡萄糖培養(yǎng)以及是否加用茶多酚干預(yù)的基礎(chǔ)上將其分組如下：NG組(葡萄糖5.6mmol/L培養(yǎng)48h)、NG+T組(葡萄糖5.6mmol/L+5μg/ml茶多酚培養(yǎng)48h)；MG組

3、(葡萄糖16.7mmol/L培養(yǎng)48h)、MG+T組(葡萄糖16.7mmol/L+5μg/ml茶多酚培養(yǎng)48h)；HG組(葡萄糖25mmol/L培養(yǎng)48h)、HG+T組(葡萄糖25mmol/L+5μg/ml茶多酚培養(yǎng)48h)。4、流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)ROS水平的改變。5、體外胰島素刺激釋放(GSIS)實(shí)驗(yàn)，放免法檢測(cè)胰島素水平。
　　 結(jié)果：1、CCK-8實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)當(dāng)茶多酚濃度為1和5μg/ml時(shí)，對(duì)NIT-1細(xì)胞的增殖活性無(wú)

4、顯著影響。2、與HG組比，NG組、HG5組ROS表達(dá)均顯著降低(P＜0.05)，HG1組ROS表達(dá)無(wú)明顯差異(P＞0.05)。3、與NG組相比，MG組、HG組ROS表達(dá)均顯著升高(P＜0.05)；HG組ROS表達(dá)量明顯高于MG組(P＜0.05)；與NG+T組相比，MG+T組、HG+T組ROS表達(dá)均顯著升高(P＜0.05)；HG+T組ROS表達(dá)量明顯高于MG+T組(P＜0.05)；NG組的ROS表達(dá)水平與NG+T組相比無(wú)明顯差異(P＞0.

5、05)；MG+T組的ROS表達(dá)比MG組的表達(dá)下降(P＜0.05)；HG+T組的ROS表達(dá)比HG組的表達(dá)下降(P＜0.05)。4、與NG組相比，MG組、HG組胰島素分泌量均顯著降低(P＜0.05)；HG組胰島素分泌量明顯低于MG組(P＜0.05)；與NG+T組相比，MG+T組、HG+T組胰島素分泌量均顯著降低(P＜0.05)；HG+T組胰島素分泌量明顯低于MG+T組(P＜0.05)；同一葡萄糖濃度組的葡萄糖刺激胰島素分泌實(shí)驗(yàn)，無(wú)論有無(wú)茶多

6、酚干預(yù)，其胰島素分泌量無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：1、1μg/ml和5μg/ml的茶多酚對(duì)NIT-1細(xì)胞無(wú)毒性。2、NIT-1細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生與葡萄糖濃度呈劑量依賴(lài)性。3、5μg/ml茶多酚可降低高糖所致的NIT-1細(xì)胞內(nèi)的ROS表達(dá)，證實(shí)了該濃度茶多酚可減輕高糖對(duì)NIT-1細(xì)胞所致的氧化損傷。4、5μg/ml茶多酚對(duì)高糖所致的NIT-1細(xì)胞的胰島素分泌功能的抑制無(wú)顯著影響，說(shuō)明此濃度的茶多酚不能恢復(fù)或者改善NIT