GSTM2在胰腺癌化療耐藥中的機(jī)制研究.pdf

1、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GSTs)不僅有細(xì)胞保護(hù)作用，而且參與抗癌藥物耐藥性的產(chǎn)生。但是，GST同工酶在胰腺癌化療耐藥中的作用仍不清楚。本研究將檢測GSTM2基因在經(jīng)吉西他濱處理的胰腺癌細(xì)胞株及接受新輔助化療的胰腺癌患者癌組織中的表達(dá)。并通過siRNA及shRNA沉默GSTM2基因，分別轉(zhuǎn)染胰腺癌細(xì)胞及注入裸鼠胰腺構(gòu)建原位移植瘤模型后用吉西他濱處理，從體外、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)兩個(gè)層面觀察在胰腺癌中沉默GSTM2對吉西他濱敏感性的影響。最后分析GST

2、M2在胰腺癌患者中的表達(dá)及與臨床預(yù)后的相關(guān)性。
　　結(jié)果表明吉西他濱處理可以增加胰腺癌細(xì)胞株及胰腺癌組織中GSTM2的表達(dá)。沉默GSTM2可使經(jīng)吉西他濱處理的胰腺癌細(xì)胞的凋亡增加、活力降低，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步表明在裸鼠胰腺原位移植瘤模型中利用shRNA誘導(dǎo)GSTM2沉默，能增強(qiáng)吉西他濱化療的藥物敏感性。研究還發(fā)現(xiàn)，GSTM2在胰腺癌組織中的表達(dá)低于正常胰腺組織，而GSTM2的高表達(dá)則與胰腺癌患者生存率高、預(yù)后好呈顯著相關(guān)。
　　

3、綜上所述，GSTM2能使接受吉西他濱處理的胰腺癌細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性并存活，故吉西他濱也能增加胰腺癌細(xì)胞株中GSTM2的表達(dá)，GSTM2在胰腺癌中的沉默有益于增強(qiáng)吉西他濱的化療效果，胰腺癌患者中GSTM2的高表達(dá)與總體生存期顯著相關(guān)。因此，GSTM2有潛力成為優(yōu)化胰腺癌化療方案選擇和預(yù)測胰腺癌預(yù)后的生物標(biāo)志物。
　　一、GSTM2在經(jīng)吉西他濱處理的胰腺癌細(xì)胞株及接受新輔助化療的胰腺癌患者癌組織中的表達(dá)
　　目的：分析吉西他濱處理胰

4、腺癌細(xì)胞及癌組織對GSTM2表達(dá)的影響。
　　材料和方法：利用qRT-PCR和western blot檢測吉西他濱處理前后GSTM2在胰腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況。收集接受吉西他濱新輔助化療后手術(shù)和僅接受外科手術(shù)的胰腺癌患者的癌組織標(biāo)本，進(jìn)行免疫組化染色，比較兩組中GSTM2表達(dá)水平的差異。
　　結(jié)果：GSTM2在經(jīng)吉西他濱處理的胰腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)水平明顯高于未經(jīng)吉西他濱處理的對照組;在接受吉西他濱化療的胰腺癌患者組織中的表達(dá)

5、水平明顯高于僅接受外科手術(shù)的患者。
　　結(jié)論：吉西他濱能使胰腺癌細(xì)胞和胰腺癌組織中的GSTM2表達(dá)水平上升，初步證實(shí)GSTM2參與胰腺癌吉西他濱化療耐藥性產(chǎn)生。
　　二、沉默GSTM2對胰腺癌化療敏感性影響的體外實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：檢測siGSTM2對吉西他濱處理胰腺癌細(xì)胞株的化療敏感性的影響。
　　材料和方法：運(yùn)用siRNA技術(shù)沉默BXPC-3、Panc-1、L3.6pl和MPanc96四種胰腺癌細(xì)胞株中的GS

6、TM2基因，利用qRT-PCR和western blot檢測沉默效果。再用吉西他濱處理上述細(xì)胞株，通過流式細(xì)胞儀檢測癌細(xì)胞的凋亡水平，應(yīng)用MTT分析法檢測細(xì)胞活力。
　　結(jié)果：qRT-PCR和western blot檢測結(jié)果示siRNA轉(zhuǎn)染4種胰腺癌細(xì)胞株成功，沉默GSTM2效率高，均在60％以上。經(jīng)吉西他濱處理后，siGSTM2組與siControl組相比癌細(xì)胞凋亡率明顯更高、活力顯著降低。
　　結(jié)論：siGSTM2能在胰

7、腺癌細(xì)胞株中高效沉默GSTM2基因。沉默GSTM2能增強(qiáng)胰腺癌細(xì)胞對吉西他濱的敏感性。
　　三、沉默GSTM2對胰腺癌化療敏感性影響的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：檢測shGSTM2對裸鼠胰腺原位移植瘤行吉西他濱化療敏感性的影響。
　　材料和方法：用shGSTM2對胰腺癌細(xì)胞株Mpanc96進(jìn)行轉(zhuǎn)染，行qRT-PCR和western blot檢測評估沉默效果。將證實(shí)已被shRNA成功轉(zhuǎn)染的Mpanc96細(xì)胞株原位注入裸鼠胰腺

8、，構(gòu)建裸鼠胰腺原位轉(zhuǎn)移瘤模型。用IVIS成像系統(tǒng)予以生物熒光成像明確成瘤效果。用吉西他濱處理胰腺癌原位瘤后，用Living Image軟件程序進(jìn)行定量分析瘤體體積變化。
　　結(jié)果：shRNA轉(zhuǎn)染Mpanc96成功且沉默GSTM2效果佳。生物熒光成像可見裸鼠胰腺位置有熒光信號，移植瘤成瘤，建模成功。shGSTM2+吉西他濱組裸鼠瘤體體積最小。
　　結(jié)論：沉默GSTM2能在體內(nèi)增強(qiáng)胰腺癌吉西他濱化療的敏感性。
　　四、GS

9、TM2在胰腺癌患者中的表達(dá)與臨床預(yù)后相關(guān)性的研究
　　目的：分析GSTM2在胰腺癌患者中的表達(dá)及與臨床預(yù)后的相關(guān)性。
　　材料和方法：收集于我院確診胰腺癌的50例手術(shù)患者的癌組織標(biāo)本，以癌旁組織及正常人的胰腺組織樣本作為對照，檢測GSTM2的mRNA表達(dá)水平的差異。根據(jù)GSTM2的平均蛋白表達(dá)量將胰腺癌樣本分為GSTM2低表達(dá)組和GSTM2高表達(dá)組，分析兩組生存期的差異。
　　結(jié)果：GSTM2在胰腺癌患者胰腺組織樣本中

10、的表達(dá)顯著低于癌旁組織及正常人的胰腺組織樣本。GSTM2低表達(dá)組的胰腺癌患者較高表達(dá)組患者的總體生存率低，預(yù)后差。
　　結(jié)論：GSTM2在正常人中的表達(dá)高于胰腺癌患者，且GSTM2高表達(dá)與胰腺癌患者生存率高、預(yù)后好呈顯著相關(guān)。
　　總結(jié)上述研究，可得出結(jié)論如下：
　　1、吉西他濱可以增加胰腺癌中GSTM2的表達(dá)。
　　2、沉默GSTM2可使經(jīng)吉西他濱處理的胰腺癌細(xì)胞凋亡增加、活力降低。
　　3、沉默GSTM