1型鴨圓環(huán)病毒間接ELISA方法的建立及流行病學調(diào)查.pdf

1、鴨圓環(huán)病毒(Duck circovirus，DuCV)屬于圓環(huán)病毒科(Circoviridae)圓環(huán)病毒屬(Circovirus)的成員之一，是一類沒有囊膜的單鏈環(huán)狀DNA病毒。自2003年在德國由Hattermann首次報道以來，相繼在匈牙利、美國、中國臺灣及中國大陸等地發(fā)現(xiàn)或報道。
　　 本研究建立了1型鴨圓環(huán)病毒間接ELISA檢測方法，并對2011年山東省濰坊和泰安兩個主要養(yǎng)鴨地區(qū)健康肉鴨群中DuCV的流行和分布情況，進行

2、了血清學調(diào)查。研究共分為三部分:
　　 1、檢測基因1型DuCV抗體的間接ELISA方法的建立及血清學調(diào)查
　　 本研究建立了檢測基因1型DuCV抗體的間接ELISA方法。采用PCR技術(shù)，擴增1型DuCV部分Cap基因，構(gòu)建原核表達質(zhì)粒pET-32a(+)-Cap; IPTG誘導表達后以純化的重組蛋白為抗原建立間接ELISA方法并初步應用于臨床檢測。結(jié)果顯示:基因1型DuCV Cap基因可在大腸桿菌中穩(wěn)定、高效地表達;W

3、estern blot檢測表明，表達的重組Cap蛋白能與鴨圓環(huán)陽性血清發(fā)生特異性反應;建立的間接ELISA方法的蛋白最佳包被量為800ng/孔，血清最佳稀釋度為1∶50，陽性的Cut-off值為0.324。以建立的間接ELISA方法進行山東省健康鴨群DuCV抗體檢測結(jié)果表明，結(jié)果顯示:肉鴨場的DuCV抗體個體陽性率在0.4％～78.125％，平均為33.80％（382/1130），群體陽性率為100％(17/17)。
　　 2、

4、2011年山東部分地區(qū)肉鴨群基因2型DuCV血清學調(diào)查
　　 為了解2型DuCV在山東地區(qū)的流行情況，本研究采用實驗室已經(jīng)建立的2型鴨圓環(huán)病毒間接ELISA方法，對2011年山東省濰坊和泰安兩個地區(qū)的17個肉鴨場1130份血清進行間接ELISA檢測。結(jié)果顯示:肉鴨場的DuCV抗體個體陽性率在2％～78％，平均為29.91％（338/1130），群體陽性率為100％(17/17)。濰坊地區(qū)的抗體陽性率(42.81％)明顯高于泰安地

5、區(qū)(17.73％)，顯示DuCV在老養(yǎng)殖區(qū)鴨群中污染更加嚴重。
　　 3、基因1型與2型DuCV共感染分析
　　 分析用檢測基因1型和基因2型DuCV抗體的間接ELISA方法分別對山東濰坊、泰安地區(qū)的肉鴨群進行血清學檢測結(jié)果，發(fā)現(xiàn)1型DuCV與2型DuCV的抗體符合率為80.7％。泰安地區(qū)兩型均為陽性的鴨只數(shù)為63，占總體檢測數(shù)的10.84％，濰坊地區(qū)，兩型均為陽性的個體為23.50％，略高于泰安地區(qū)。統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)基因1型和