地塞米松誘導(dǎo)細(xì)胞自噬增強(qiáng)HBV病毒的復(fù)制和產(chǎn)生.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:探討地塞米松對(duì)HBV病毒復(fù)制及蛋白表達(dá)的影響，并探索細(xì)胞自噬在其中的作用機(jī)制。
　　方法:培養(yǎng)HepG22.2.15細(xì)胞，設(shè)置實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。地塞米松或?qū)φ盏忍幚砗螅捎脤?shí)時(shí)熒光定量PCR(Q-PCR)檢測(cè)HBV RNA，DNA表達(dá)水平;酶聯(lián)免疫(ELISA)檢測(cè)細(xì)胞上清液中HBsAg的含量;印記雜交法(Southern blot)檢測(cè)HBV中間復(fù)制體;免疫蛋白印跡法(Western blot)檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白表達(dá)水平，透射

2、電鏡技術(shù)觀察自噬小體典型的雙層膜結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)果:與對(duì)照處理組相比較，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中HBsAg濃度隨地塞米松處理時(shí)間及濃度在一定的程度上相應(yīng)增加，HBV RNA和DNA水平均明顯增高（*P＜0.05）。地塞米松處理組，自噬小體明顯增多，LC3Ⅱ蛋白水平上升明顯，LC3Ⅰ蛋白表達(dá)水平下降，LC3Ⅱ/Ⅰ比值逆轉(zhuǎn)。加入自噬抑制劑3-MA后，地塞米松誘導(dǎo)的自噬現(xiàn)象減弱，HBV中間復(fù)制體水平和細(xì)胞培養(yǎng)液中HBsAg水平也明顯下降。<

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