長春花突變愈傷組織的培養(yǎng)及其藥用成分的研究.pdf

1、本實驗室以秋水仙堿處理藥用植物長春花(Catharanthus roseus)的愈傷組織得到了突變愈傷組織。突變愈傷組織從表觀特征、染色體數(shù)目、顯微結(jié)構(gòu)、生物產(chǎn)量、藥用成分含量等方面都有別于普通愈傷組織。它的生長速率和藥用成分含量明顯高于普通愈傷組織，并且通過RP-HPLC分析，還含有普通愈傷組織沒有的未知成分。所以，長春花突變愈傷組織可能成為更適用于工業(yè)化生產(chǎn)長春花藥用成分的理想材料。
　　 本文以突變愈傷組織為實驗材料，采用

2、RP-HPLC測定法，圍繞提高長春質(zhì)堿和阿瑪堿含量，重點開展了突變愈傷組織的培養(yǎng)條件優(yōu)化、吲哚生物堿的增產(chǎn)處理、未知成分的鑒定和突變愈傷組織植株再生等方面的研究。
　　 培養(yǎng)條件的優(yōu)化研究發(fā)現(xiàn)：光培養(yǎng)既有利于突變愈傷組織生長又有利于長春質(zhì)堿、阿瑪堿的積累；pH6.5的培養(yǎng)基最適于突變愈傷組織的生長和長春質(zhì)堿、阿瑪堿的積累；綜合生物產(chǎn)量和吲哚總堿含量兩方面考慮，蔗糖較葡萄糖更適合作為碳源，且40 g·L-1蔗糖處理的突變愈傷組織中

3、長春質(zhì)堿達(dá)到65.53μg·g-1FW，是對照的6倍多；隨繼代次數(shù)的增加，吲哚生物堿呈現(xiàn)出先上升后下降的變化趨勢。
　　 植物生長物質(zhì)2，4-D的存在對于突變愈傷組織的生長和吲哚生物堿的積累有一定的抑制作用；KT對突變愈傷組織生長和藥用成分積累的作用優(yōu)于6-BA；ABA抑制了突變愈傷組織的生長，但有利于吲哚總堿包括阿瑪堿和長春質(zhì)堿的積累；乙烯利對生物產(chǎn)量和吲哚生物堿的積累都有促進(jìn)作用。
　　 吲哚生物堿合成的前體物質(zhì)色氨

4、酸、鈣和鋅離子、有機(jī)化合物NAE12和NAE18對吲哚生物堿積累均有不同程度的正向調(diào)節(jié)作用。其中1mg·L-1的NAE18對吲哚生物堿的積累有明顯的促進(jìn)作用，長春質(zhì)堿的含量是對照的7倍。
　　 利用RP-HPLC分離純化了未知成分，通過HPLC-MS分析檢測未知成分的分子量是239，并通過二級碎片分析，含有一個分子量為161的基團(tuán)，由于抗癌藥物的前體之一文多靈中也含有一個分子量為161的基團(tuán)，推斷未知成分可能與文多靈有一定的關(guān)系