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1、本文以通蓖5號(hào)為試材,采用花藥培養(yǎng)的方法,對(duì)蓖麻花藥培養(yǎng)中誘導(dǎo)愈傷組織的影響因素進(jìn)行了研究。結(jié)果表明: 接種前對(duì)蓖麻花蕾進(jìn)行滅菌處理,流水緩慢沖洗30min,在無(wú)菌條件下,先用75%乙醇處理30s,然后用0.1%升汞處理3min效果最好,獲得無(wú)菌材料多。在含20ml固體培養(yǎng)基的50ml三角瓶中,接種密度以3/5個(gè)花蕾的花藥量為最佳。在常用于花藥培養(yǎng)的的MS、NB、N6、Bs四種培養(yǎng)基中,雖然均可誘導(dǎo)花藥產(chǎn)生愈傷組織,但以MS培養(yǎng)
2、基誘導(dǎo)效果最好。 花藥培養(yǎng)前對(duì)蓖麻花蕾進(jìn)行低溫預(yù)處理可明顯提高蓖麻花藥培養(yǎng)愈傷組織的形成,但時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,都不利于愈傷組織的增殖。其中4℃條件下對(duì)花蕾處理Sd,蓖麻花藥培養(yǎng)愈傷組織增殖率最高。接種后對(duì)花藥進(jìn)行低溫預(yù)培養(yǎng)3d同樣可以提高蓖麻花藥愈傷組織增殖率。適宜的高溫與處理天數(shù),能促進(jìn)愈傷組織的產(chǎn)生。給予蓖麻花藥33℃的高溫處理48h最有利于蓖麻愈傷組織的增殖。 在花藥誘導(dǎo)愈傷組織階段,蔗糖和麥芽糖在蓖麻花藥培養(yǎng)中僅起
3、調(diào)節(jié)滲透壓和提供碳源的作用,在誘導(dǎo)蓖麻花藥產(chǎn)生愈傷組織效率方面無(wú)差異,蔗糖濃度為30g/L時(shí),愈傷組織增殖率最高。在蓖麻花藥培養(yǎng)誘導(dǎo)愈傷過(guò)程中,最佳PGR為:6-BA1.5mg/L,NAA0.9mg/L。在基本培養(yǎng)基中瓊脂含量為7g/L時(shí),愈傷組織增殖率最高。誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加適宜濃度的脯氨酸(750mg/L)和水解酪蛋白(750mg/L)可以提高蓖麻花藥愈傷組織的增殖率。100mg/L的抗壞血酸可以緩解花藥離體培養(yǎng)中花藥的褐化現(xiàn)象?;钚?/p>
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