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1、目的:丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)能夠引起肝臟組織的損傷,從而造成慢性炎癥的發(fā)生,其中一小部分慢性炎癥又會(huì)發(fā)展為肝硬化,肝癌。引起慢性HCV感染的其中一個(gè)原因就是機(jī)體內(nèi)免疫抑制系統(tǒng)的激活,其中有許多免疫抑制細(xì)胞發(fā)揮著重要的作用,如調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Regulatory Tcell,Treg)。Treg細(xì)胞在炎癥部位的積累能夠影響免疫效應(yīng)細(xì)胞對(duì)病毒的清除,抑制這些細(xì)胞的功能。近年來(lái),大量研究證明了Treg細(xì)胞能夠
2、誘導(dǎo)免疫耐受,影響HCV特異性的淋巴細(xì)胞的增殖、分化和細(xì)胞因子的釋放。本研究主要收集慢性HCV感染的患者外周血,將Treg細(xì)胞分為三個(gè)亞群,檢測(cè)這些患者外周血中Treg細(xì)胞及三個(gè)亞群的比例以及外切核酸酶CD39、CD73和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(Transforming growth factor β,TGF-β)的表達(dá);同時(shí)體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)檢測(cè)抗病毒藥物治療或處理后Treg細(xì)胞及三個(gè)亞群的比例的變化;最終,本研究還比較了獲得穩(wěn)定病毒學(xué)應(yīng)答(St
3、able virological response,SVR)的患者和未獲得SVR患者外周血中的Treg細(xì)胞及其三個(gè)亞群的比例,探究Treg細(xì)胞是否參與慢性炎癥的發(fā)生。
方法:研究對(duì)象主要為慢性丙型肝炎患者,這些患者都在2013年至2015年就診于鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院,其中慢性丙型肝炎患者收集了105例,健康對(duì)照收集了40例。收取慢性丙型肝炎患者和健康對(duì)照的外周血,密度梯度離心法獲得外周血單個(gè)核細(xì)胞,并凍存部分細(xì)胞于-80℃?zhèn)溆?/p>
4、;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血中Treg細(xì)胞及三個(gè)亞群的比例和抑制性分子CD39、CD73和TGF-β的表達(dá),同時(shí)流式細(xì)胞分選技術(shù)分選出純化的Treg細(xì)胞;體外加抗病毒藥物處理患者外周血單個(gè)核細(xì)胞和純化的Treg細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Treg細(xì)胞的比例變化或抑制性分子CD39、CD73和TGF-β的變化。
結(jié)果:
1.與健康對(duì)照相比,慢性HCV患者外周血中總Treg細(xì)胞、rTreg細(xì)胞和aTreg細(xì)胞的比例都有上調(diào)的趨勢(shì),而n
5、on-Treg細(xì)胞的比例沒(méi)有明顯的變化。
2.慢性HCV感染的患者外周血中aTreg細(xì)胞上CD39、CD73和TGF-β表達(dá)最高;同時(shí)患者外周血中CD4+CD25-T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞上也表達(dá)CD39、CD73和TGF-β。
3.HCV基因型為2a和1b的患者,除了non-Treg細(xì)胞在不同的治療階段沒(méi)有變化,總Treg、rTreg和nTreg細(xì)胞的比例隨著不同治療周期有所變化。
4.體外加藥實(shí)驗(yàn)中,與抗
6、病毒藥物處理前相比,抗病毒藥物處理后總Treg、non-Treg、rTreg、aTreg比例都下降,non-Treg和aTreg細(xì)胞分泌TGF-β的量減少;同時(shí)體外加藥處理純化的Treg細(xì)胞發(fā)現(xiàn)與抗病毒藥物處理前相比,CD73和TGF-β在抗病毒藥物處理后比例下降。
5.與未獲得SVR的慢性HCV患者相比,獲得SVR的慢性HCV患者外周血中non-Treg和rTreg細(xì)胞的比例沒(méi)有明顯的變化,總Treg和rTreg細(xì)胞的比例明
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