降糖對大鼠下丘腦弓狀核NPY神經(jīng)元胞內(nèi)鈣水平的影響及其機(jī)制.pdf

1、本文從以下幾部分進(jìn)行介紹：
　　第一部分降糖對大鼠下丘腦弓狀核NPY神經(jīng)元胞內(nèi)鈣離子濃度的影響
　　目的:下丘腦作為能量代謝的調(diào)節(jié)中樞,能夠靈敏感受循環(huán)中能量物質(zhì)的濃度變化而進(jìn)行反饋性調(diào)節(jié)。因此本實(shí)驗(yàn)選用原代培養(yǎng)的下丘腦弓狀核 NPY神經(jīng)元,采用降糖細(xì)胞外液灌流,觀察降糖對下丘腦弓狀核NPY神經(jīng)元的胞內(nèi)鈣影響。
　　方法:采用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)對下丘腦弓狀核(ARC)NPY神經(jīng)元進(jìn)行鑒定;采用熒光鈣離子成像技術(shù)記錄下丘腦

2、弓狀核NPY神經(jīng)元胞內(nèi)鈣離子水平的變化。
　　結(jié)果:當(dāng)細(xì)胞外葡萄糖濃度從10 mM降至1 mM時,下丘腦ARC-NPY神經(jīng)元胞內(nèi)鈣F340 nm/F380 nm比值由0.55±0.04升高到0.73±0.11,上升百分率為28.7±8.5％。
　　結(jié)論:降糖灌流液引起下丘腦弓狀核NPY神經(jīng)元胞內(nèi)鈣離子水平升高。
　　第二部分降糖引起大鼠下丘腦ARC-NPY神經(jīng)元胞內(nèi)鈣升高的來源
　　目的:下丘腦能根據(jù)循環(huán)中能量物

3、質(zhì)的濃度變化而進(jìn)行反饋性調(diào)節(jié)。胞外葡糖糖濃度的改變會引起弓狀核 NPY神經(jīng)元胞內(nèi)鈣離子濃度的升高,從而使其下游分子鈣依賴的CaMKKII等激酶磷酸化,發(fā)揮生理效應(yīng)。但降糖是通過何種機(jī)制引起胞內(nèi)鈣升高,目前尚未清楚。因此本實(shí)驗(yàn)選用原代培養(yǎng)的下丘腦弓狀核 NPY神經(jīng)元,采用降糖灌流液處理,觀察降糖引起下丘腦弓狀核NPY神經(jīng)元胞內(nèi)鈣升高的來源。
　　方法:采用熒光鈣離子成像技術(shù),對下丘腦弓狀核 NPY神經(jīng)元進(jìn)行胞內(nèi)鈣離子水平記錄,用無鈣

4、外液和各種工具藥,探討降糖引起細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平增加的來源。
　　結(jié)果:(1)無鈣灌流液取消降糖引起的下丘腦弓狀核 NPY神經(jīng)元胞內(nèi)鈣離子升高。(2)除特異性P/Q型該通道阻斷劑ω-agatoxin TK以外,AMPA受體阻斷劑CNQX, NMDA受體阻斷劑MK-801和D-APV,L型鈣通道阻斷劑nifedipine,N型鈣通道阻斷劑ω-conotoxin GVIA均不能抑制降糖引起的下丘腦弓狀核NPY神經(jīng)元胞內(nèi)鈣離子升高。

5、>　　結(jié)論:降糖引起的下丘腦弓狀核 NPY神經(jīng)元內(nèi)鈣升高是外鈣依賴的機(jī)制,并且與P/Q型鈣通道開放有關(guān)。
　　第三部分降糖引起大鼠下丘腦ARC-NPY神經(jīng)元胞內(nèi)鈣升高的機(jī)制
　　目的:AMPK是調(diào)節(jié)攝食和能量代謝的重要分子,而在肝臟等其他組織,AMPK下游分子GSK3β可調(diào)節(jié)P/Q型鈣通道,因此本實(shí)驗(yàn)研究AMPK對GSK3β的調(diào)節(jié)作用是否參與降糖通過P/Q型鈣通道引起下丘腦弓狀核NPY神經(jīng)元胞內(nèi)鈣離子升高的作用。
　　

6、方法:對原代培養(yǎng)的下丘腦神經(jīng)元分別進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn):(1)采用western blot技術(shù)檢測降糖對AMPK和GSK3β磷酸化的影響;(2)采用熒光鈣離子成像技術(shù)觀察AMPK對 GSK3β的調(diào)節(jié)是否參與降糖引起的下丘腦弓狀核 NPY神經(jīng)元的細(xì)胞內(nèi)鈣離子升高。
　　結(jié)果:(1)降糖引起下丘腦弓狀核NPY神經(jīng)元AMPK和GSK3β磷酸化增加;(2) AMPK激活增加降糖引起的神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鈣離子升高幅度,該效應(yīng)可被GSK3β抑制劑模擬。