豬傳染性胃腸炎和流行性腹瀉二聯(lián)核酸疫苗免疫效力研究.pdf

1、豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)和豬流行性腹瀉病毒(PEDV)感染可造成以仔豬急性腸炎,腹瀉和死亡為主要癥狀的豬傳染性胃腸炎(TGE)和流行性腹瀉(PED)。有效防治措施是疫苗接種。當(dāng)前應(yīng)用的TGE和PED疫苗在疫苗穩(wěn)定性、安全性及保護(hù)率等方面還有一定的不足;同時(shí)這兩種疾病發(fā)病機(jī)制還不是十分清楚,導(dǎo)致這兩種疾病仍對(duì)養(yǎng)豬業(yè)影響嚴(yán)重。因此,研制新型有效的用于防治TGEV和PEDV的疫苗具有實(shí)踐意義。纖突蛋白(S)是TGEV和PEDV表面突起的

2、糖蛋白,可以誘導(dǎo)動(dòng)物機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生特異性的中和抗體并且能夠介導(dǎo)病毒與細(xì)胞膜上特異受體結(jié)合,參與細(xì)胞膜融合等過程,是作為主要免疫保護(hù)性抗原的主要候選基因。核酸疫苗具有成分明確、成本低廉、便于儲(chǔ)藏運(yùn)輸?shù)葍?yōu)點(diǎn)。以前的研究已經(jīng)表明TGEVS基因N端部分(2106bp)(TGEVS1)比全長S基因免疫效果更好;而目前沒有關(guān)于PEDVS基因核酸疫苗的報(bào)道。因此本研究構(gòu)建了同時(shí)編碼TGEVS1和PEDVS1(pIRES-T1-P1)以及TGEVS1

3、和PEDVS(plRES-T1-P2)兩個(gè)二聯(lián)核酸疫苗。用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染到BHK-21細(xì)胞中,利用間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)檢測兩個(gè)重組質(zhì)粒在真核細(xì)胞中的表達(dá)情況。結(jié)果表明兩個(gè)重組質(zhì)粒編碼的三種蛋白均能在真核表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)。在此基礎(chǔ)上,利用6-8周齡的昆明鼠進(jìn)行免疫特性研究。取小鼠脾臟和外周血淋巴細(xì)胞測定淋巴細(xì)胞增殖,淋巴細(xì)胞CTL活性;取小鼠血清檢測了病毒中和抗體,干擾素-γ,用間接ELISA方法檢測了TGEV/PEDV特異性抗體IgG