黃芪甲苷聯(lián)合川穹嗪對糖尿病大鼠的腎臟保護(hù)作用及其基于AKt-mTOR的機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　研究黃芪甲苷聯(lián)合川穹嗪對STZ加高脂飼料誘導(dǎo)的糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)作用，同時探討其對Akt/mTOR信號通路的影響，為兩藥聯(lián)合用于防治糖尿病及其腎臟并發(fā)癥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　1.實(shí)驗(yàn)動物:
　　SPF級雄性SD大鼠68只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后按體重隨機(jī)分成正常組8只，糖尿病模型組60只。模型組大鼠尾靜脈注射30mg·kg-1STZ，注射當(dāng)天開始喂于高糖高脂飼料;正常組大鼠尾靜脈注射等體積的枸櫞

2、酸緩沖液，并給予普通標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)。4周后，禁食12h，模型組大鼠尾靜脈采血測定血糖，篩選空腹血糖≥16.7mmol·L-1，并具有明顯多飲、多食、多尿癥狀的40只大鼠作為Ⅱ型糖尿病模型大鼠。
　　2.藥物干預(yù):
　　將40只成模大鼠按血糖和體重隨機(jī)分成5組，即糖尿病模型組、黃芪甲苷組、川芎嗪組、黃芪甲苷聯(lián)合川芎嗪組、纈沙坦陽性組，每組8只。黃芪甲苷組、川芎嗪組、黃芪甲苷聯(lián)合川芎嗪組、纈沙坦陽性組的劑量分別為:20mg·kg-

3、1、150mg·kg-1、20mg·kg-1+150mg·kg-1和25mg·kg-1，模型組和正常組大鼠按體重灌胃給予生理鹽水，給藥容積為10ml·kg-1，每日一次，連續(xù)給藥6周。
　　3.指標(biāo)檢測:
　　實(shí)驗(yàn)大鼠經(jīng)藥物干預(yù)后，觀察大鼠一般體征情況;定期尾靜脈取血測定空腹血糖、糖化血紅蛋白。定期測定大鼠體重、攝食量和飲水量，并用代謝籠收集24h尿液，測定尿量及24h尿蛋白。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時心臟取血測定總膽固醇(CHOL)、甘油

4、三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、微量白蛋白(ALB)、總蛋白(TP)等血液生化指標(biāo);剝離大鼠腎臟計算腎臟指數(shù);HE染色觀察大鼠腎臟病理變化;Western blot檢測腎臟AKT/mTOR蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1.糖尿病模型大鼠的糖化血紅蛋白、血糖水平比正常對照組顯著升高，體重明顯下降，飲食、飲水、尿量、CHOL、TG、LDL-C等明顯增加，符合Ⅱ型糖尿病癥狀。血清提取

5、液測得腎損傷的相關(guān)指標(biāo)BUN、Scr水平顯著增加，尿生化顯示24小時尿蛋白顯著增加，腎臟指數(shù)升高，HE染色結(jié)果顯示大鼠腎臟腎小球體積增大，系膜基質(zhì)增多，腎小管上皮空泡樣變，符合糖尿病大鼠腎臟早期損傷診斷。黃芪甲苷(20mg·kg-1)組能提高大鼠HDL-C，降低Scr、ALB，但無法有效控制血糖和降低BUN、24小時尿蛋白等;川芎嗪(150mg·kg-1)組能顯著降低大鼠FPG，但不能有效控制LDL-C等血脂相關(guān)指標(biāo)和BUN、Scr、2

6、4小時尿蛋白等腎臟相關(guān)指標(biāo);黃芪甲苷聯(lián)合川芎嗪(20mg·kg-1+150mg·kg-1)組能有效降低糖尿病大鼠HbA1c和FPG水平，降低攝食量和飲水量，增加體重，降低TG、LDL-C、Scr、BUN、ALB、TP等血生化指標(biāo)，降低24小時尿蛋白，減輕腎臟指數(shù)和改善腎臟病理改變。結(jié)果顯示聯(lián)合用藥的降血糖和腎臟保護(hù)作用較單獨(dú)用藥明顯增強(qiáng)。此外，黃芪甲苷和川芎嗪聯(lián)合用藥在控制血糖方面與陽性藥纈沙坦(25mg·kg-1)的作用相當(dāng)，且在改善

7、BUN、Scr等腎損傷指標(biāo)方面顯示了一定的優(yōu)勢。
　　2.Western blot結(jié)果顯示，各組大鼠腎組織Akt總蛋白無顯著性差異模型組大鼠腎組織磷酸化Akt蛋白表達(dá)顯著高于正常組，所有給藥組大鼠的腎組織磷酸化Akt蛋白表達(dá)水平較模型組均有一定程度降低，其中Lig組和Ast IV+Lig組顯著性降低。此外，各實(shí)驗(yàn)組大鼠腎組織mTOR總蛋白表達(dá)無顯著性差異，聯(lián)合用藥組組大鼠腎組織磷酸化mTOR蛋白較模型組顯著降低，黃芪甲苷聯(lián)合川芎嗪

8、組可能通過抑制Akt/mTOR信號通路發(fā)揮保護(hù)糖尿病腎臟作用。
　　結(jié)論:
　　1.黃芪甲苷聯(lián)合川穹嗪可改善STZ加高脂飼料誘導(dǎo)糖尿病大鼠的一般體征狀況，有效降低糖化血紅蛋白和空腹血糖水平，改善TG、LDL-C等脂代謝相關(guān)指標(biāo)，且優(yōu)于黃芪甲苷、川芎嗪單獨(dú)用藥。
　　2.黃芪甲苷聯(lián)合川穹嗪可改善Scr、BUN等腎損傷指標(biāo)，降低24小時尿蛋白，改善腎功能，減輕腎臟指數(shù)和改善腎臟病理改變，其腎臟保護(hù)作用優(yōu)于黃芪甲苷、川芎嗪單