慢加急性肝衰竭內毒素血癥對清道夫受體CD163作用的研究.pdf

1、【目的】
　　 探討局限表達在單核巨噬細胞系的清道夫受體CD163與血清中可溶性CD163(Scd163)在慢加急性肝衰竭(ACLF)中的臨床表達和意義，肝衰竭內毒素血癥對CD163調節(jié)免疫的影響以及糖皮質誘導CD163表達對肝衰竭大鼠的保護作用。
　　 【方法】
　　 1.收集ACLF患者的血清，新鮮血液標本，肝移植組織標本以及臨床資料。
　　 2.Elisa檢測血清中Scd163,分析Scd163與臨

2、床資料的聯(lián)系。
　　 3.鱟試劑檢測血清中LPS。
　　 4.流式分析儀檢測CD163、HLA-DR分子在外周血單核細胞的表達。
　　 5. Real-time PCR檢測外周血單核細胞CD163，TLR4轉錄。
　　 6. LPS體外刺激ACLF患者外周血單核細胞，Elisa檢測Scd163、TNF-a、IL-10等。
　　 7. HE染色，免疫組化方法檢測 CD163陽性枯否細胞在ACLF肝組

3、織上的表達。
　　 8. HE染色，免疫組化觀察糖皮質激素對正常大鼠肝組織內枯否細胞表達CD163分子的影響。
　　 9. 采用全自動生化分析儀器測定肝衰竭大鼠與糖皮質激素給藥組大鼠血清谷丙轉氨酶，總膽紅素。
　　 10. Elisa測定肝衰竭以及糖皮質激素給藥組大鼠血清中Scd163。
　　 11. 采用HE染色觀察肝衰竭大鼠與造模后予以糖皮質激素組大鼠肝組織的病理改變。
　　 12．Weste

4、rn blotting分析肝衰竭模型組，造模后立即給藥組（即0h給藥組）、4h給藥組、8h給藥組的肝組織CD163、HO-1的表達。
　　 【結果】
　　 1.ACLF患者Scd163水平較肝硬化、慢性乙肝、急性肝炎組和正常組增高（P<0.05）。
　　 2.經Pearson相關分析，ACLF患者入院時血清Scd163與臨床生化指標總膽紅素和反映凝血功能的國際標準化比值呈正相關, (P<0.05)。
　　

5、 3.ACLF患者合并感染或肝腎綜合征或者肝性腦病等并發(fā)癥時，血清中Scd163水平明顯高于非感染組與無并發(fā)癥組，(P<0.05)。
　　 4.ACLF患者死亡組Scd163水平在入院時和出院時均高于存活組(P<0.05), 死亡組病情加重時，Scd163有增高趨勢；而存活組出院時Scd163較入院時有降低的趨勢。
　　 5. ACLF組內毒素血癥發(fā)生率以及內毒素水平明顯高于肝硬化組、慢性乙肝組、急性肝炎組和正常組，（P

6、<0.05）。
　　 6．繪制LPS與Scd163值的散點圖，內毒素血癥與血清中Scd163水平具有一定的相關性，r=0.56。
　　 7．ACLF患者死亡組外周血單核細胞體外接受LPS刺激后上清液中TNF-a 低于正常組與存活組，（P<0.05）；而IL-10和Scd163水平高于正常組和存活組，（P<0.05）。
　　 8. ACLF患者死亡組CD163 MFI低于存活組和正常組，（P<0.05）；死亡組中的

7、外周血單核細胞表面HLA-DR分子表達最低、存活組次之、正常組（P<0.05）。
　　 9．ACLF患者外周血單核細胞CD163 Mrna表達上調高于慢性重度組、慢性乙肝輕中度組、正常組，（P<0.05）；外周血單核細胞TLR4 Mrna表達也上調，但低于慢性重度組，而高于正常組、慢性輕中度組（P<0.05）。
　　 10. ACLF移植肝組織HE染色后可見：再生肝結節(jié)內肝細胞廣泛氣球樣變，壞死出現空洞，肝竇內可見亮黃色

8、膽栓，以及存在不同程度的肝小葉界面性壞死和纖維化增生，膽小管增生；匯管區(qū)內巨噬細胞多見。
　　 11. ACLF肝組織標本免疫組化染色顯示肝竇內多見三角形、細長型、形狀不規(guī)則的染成棕黃色細胞，即為標記的CD163陽性枯否細胞，正常組織內偶可見染成棕色枯否細胞。
　　 12. 正常組與地塞米松誘導組的大鼠6h后比較：肝組織免疫組化染色顯示地塞米松誘導組CD163陽性枯否細胞數量較正常組明顯增多，而血清中Scd163水平無差

9、異，肝組織結構均完整。
　　 13. 肝衰竭模型組大鼠血清中Scd163水平比給藥組減少，造模后立即給藥組Scd163水平高于4h給藥組、8h給藥組（P<0.05）；
　　 14．造模后給藥組CD163，HO-1表達較肝衰竭造模組升高，P<0.05；而造模后8h給藥組的CD163，HO-1最高，4h組給藥組次之，立即給藥組CD163與HO-1表達最低，（P<0.05）。
　　 【結論】
　　 1．在ACL

10、F患者中血清Scd163顯著增多，明顯高于肝硬化、慢性乙肝、急性肝炎和健康對照組，提示Scd163是ACLF的敏感血清標志蛋白；合并腹膜炎的患者Scd163水平增高，提示血清中Scd163的水平與感染相關，可能是臨床反映感染的指標；Scd163與TBIL和INR相關，一定程度上可以反映ACLF患者的病情。
　　 2．ACLF死亡組患者中，血清Scd163水平明顯高于存活組，死亡組經治療后Scd163仍處于較高的水平，存活組在經過

11、治療后Scd163呈下降的趨勢，該研究提示Scd163的基礎水平以及治療過程中的變化趨勢可以一定程度上反映ACLF患者的治療效果及預后。
　　 3.ACLF患者血清Scd163、LPS水平均增高，LPS識別受體TLR4表達也上調，Pearson檢驗顯示Scd163與LPS水平呈正相關，相關系數r=0.56，結果提示ACLF患者Scd163增高與體內內毒素血癥誘發(fā)的機體感染有關。
　　 4.ACLF患者中外周血單核細胞CD

12、163mRNA水平增高，單核細胞CD163表達減少，提示血清中Scd163可能一部分來自外周血單核細胞CD163蛋白水解。
　　 5. 體外用LPS繼續(xù)刺激ACLF患者分離的外周血單核細胞，結果顯示死亡組患者分泌TNF-a水平較正常組均減少，而Scd163、IL-10分泌增多；ACLF患者外周血單核細胞上HLA-DR表達水平明顯下調，死亡組患者較存活組和正常組HLA-DR下調更加顯著，血清中Scd163增高更加顯著，提示在慢性肝

13、病病理基礎上內毒素血癥長期刺激可造成ACLF對LPS耐受，患者體內存在炎癥反應到抗炎反應的免疫紊亂，過高的Scd163標志著機體的免疫耐受，耐受的巨噬細胞使機體處于癱瘓狀態(tài)，增加了后續(xù)感染的風險，因而過高的Scd163有更高的死亡風險，預后不良。
　　 6．我們的結果證實糖皮質激素在體內可以誘導肝內表達CD163的枯否細胞增多，造模后立即給藥組及4h給藥組對急性肝衰竭大鼠有保護作用，而血清中Scd163明顯增多，提示早期給予糖皮