JEV-YFV嵌合病毒作為黃熱病毒疫苗的抗原性和免疫原性研究.pdf

1、以乙腦疫苗株SA14-14-2的DNA-based復(fù)制子質(zhì)粒和YF-17D prME基因?yàn)榛A(chǔ)，構(gòu)建新型人工JEV-YFV嵌合病毒，評(píng)價(jià)該嵌合病毒作為黃熱病毒減毒活疫苗的抗原性和免疫原性。利用DNA-based雙質(zhì)粒系統(tǒng)，把SA14-14-2的prM-E基因用YF-17D的prM-E基因進(jìn)行替換，構(gòu)建SA14-14-2和YF-17D疫苗株的嵌合型cDNA克隆，轉(zhuǎn)染細(xì)胞獲得JEV-YFV嵌合病毒。采用噬斑法、鑒定實(shí)驗(yàn)、免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

2、等對(duì)獲得的拯救病毒進(jìn)行生物學(xué)特性研究和疫苗有效性評(píng)價(jià)。JEV-YFV嵌合型cDNA轉(zhuǎn)染Vero細(xì)胞后，獲得拯救病毒，病毒滴度達(dá)到1.39×107PFU/mL，噬斑呈現(xiàn)“針尖”樣，與YF-17D噬斑大小形態(tài)相近，但略小于SA14-14-2產(chǎn)生的噬斑。血清學(xué)方法鑒定證實(shí)為乙腦/黃熱病毒嵌合病毒，命名為rYJ。通過(guò)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)、神經(jīng)毒性實(shí)驗(yàn)、攻毒等實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)rYJ和YF-17D對(duì)3～4周齡Balb/c小鼠均無(wú)神經(jīng)外毒性，有相似的神經(jīng)內(nèi)毒性。rY

3、J免疫后小鼠血清抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率達(dá)到100％，中和抗體滴度達(dá)到＞1∶40，與YF-17D基本相同，用100000 LD50 YFV進(jìn)行攻毒，rYJ免疫組和YF-17D免疫組均達(dá)到100％的保護(hù)效力。rYJ嵌合病毒的成功構(gòu)建進(jìn)一步支持了SA14-14-2成為新型疫苗載體的可能性，作為YFV減毒疫苗株，其具有良好的的抗原性和免疫原性，但是出于疫苗安全性考慮，我們可以對(duì)病毒的包膜E區(qū)進(jìn)行改造，進(jìn)一步降低對(duì)戒奶小鼠的神經(jīng)內(nèi)毒性，研制比現(xiàn)用疫苗YF-1