紅景天苷對力竭大鼠不同時相的心肌線粒體生物發(fā)生關(guān)鍵調(diào)控因子的影響.pdf

1、目的:過氧化物酶增殖物激活受體γ輔助激活因子-1α(Peroxisomeproliferator-activated receptorγ，coactivator1α，PGC-1α)、核呼吸因子NRF-1(Nuclear respiratory factor-1)和NRF-2(Nuclear respiratory factor-2)是調(diào)控線粒體生物發(fā)生的關(guān)鍵因子，適量運(yùn)動訓(xùn)練能夠誘導(dǎo)其表達(dá)，從而刺激線粒體生物發(fā)生，但力竭運(yùn)動后PGC-1

2、α、NRF-1、NRF-2的表達(dá)有何變化尚不明確。我們以通過建立一次性力竭游泳模型，研究力竭運(yùn)動對線粒體生物發(fā)生關(guān)鍵調(diào)控因子PGC-1α、NRF-1、NRF-2在力竭運(yùn)動后不同時相的基因及蛋白表達(dá)的影響，探討力竭運(yùn)動對線粒體生物發(fā)生的影響，以及紅景天苷(Salidroside，SAL)對力竭大鼠心肌的保護(hù)作用。
　　方法:
　　1.清潔級健康雄性SD大鼠104只，平均體重(120±20g)，隨機(jī)分為13組，對照組（seden

3、tary control group）、力竭組(exhausted exercise group)(即刻、6h、12h、24h)、低劑量SAL力竭組(Low-SAL and exhaustedexercise group)(即刻、6h、12h、24h)、高劑量SAL力竭組(High-SAL andexhausted exercise group)(即刻、6h、12h、24h)(n=8)。對照組、力竭組給予生理鹽水(NS)（10ml/kg

4、）灌胃14天，低劑量和高劑量組給予SAL(100mg/kg)和(300mg/kg)灌胃14天，力竭組、低劑量組和高劑量組灌胃結(jié)束后建立力竭模型。力竭模型為一次性力竭游泳運(yùn)動，參照Thomas等的力竭標(biāo)準(zhǔn)建立。在排除實(shí)驗(yàn)過程中死亡動物后，最終進(jìn)入統(tǒng)計數(shù)據(jù)分析的實(shí)驗(yàn)動物每組為6只。
　　2.采用ELISA試劑盒檢測血清中心肌損傷標(biāo)志酶含量，包括乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌鈣蛋白(cTnI)等。
　　3.

5、采用熒光定量PCR方法檢測各組大鼠心肌PGC-1α、NRF-1、NRF-2的基因表達(dá)。
　　4.采用Western Blot方法檢測各組大鼠心肌PGC-1α、NRF-1、NRF-2的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.各組大鼠血清中的LDH的含量(U/L)比較:與對照組（0.92±0.04）相比，力竭各組、低劑量力竭6h組（1.14±0.10）、12h組（1.10±0.07）、高劑量力竭12h組（1.09±0.12）血清中

6、的LDH的含量均顯著增高(P＜0.05)。力竭組的LDH在力竭后12h表達(dá)量最高。與相同時相的力竭組相比，低劑量力竭即刻組，高劑量力竭即刻組，6h組血清中的LDH的含量明顯下降(P＜0.05)。
　　2.各組大鼠血清中CK-MB的含量(ng/ml)比較:與對照組（2.11±0.18）相比，其余各組血清中的CK-MB含量均顯著增高(P＜0.05)。力竭組的CK-MB在力竭后6h表達(dá)量最高。與相同時相的力竭組相比，低劑量力竭6h組，高

7、劑量力竭即刻組，6h組血清中的CK-MB含量顯著降低(P＜0.05)。
　　3.各組大鼠血清中cTnI的含量(pg/ml)比較:與對照組（144.61±12.71）相比，力竭各組、低劑量力竭6h組（186.77±9.54）、12h組（180.29±7.42）、24h組（168.69±16.43）、高劑量力竭6h組（178.93±17.58）、12h組（172.95±16.24）血清中的cTnI的含量均顯著增高(P＜0.05)。力竭

8、組的cTnI在力竭后12h表達(dá)量最高。與相同時相的力竭組相比，高劑量力竭12h組血清中的cTnI的含量顯著降低(P＜0.05)。
　　4.各組大鼠心肌PGC-1α基因的表達(dá)量比較:與對照組相比，其余各組大鼠心肌的PGC-1α mRNA表達(dá)量顯著增高，且即刻組表達(dá)量最高，隨時間延長表達(dá)量呈下降趨勢(P＜0.05)。與相同時相的力竭組相比，低劑量及高劑量各組大鼠心肌的PGC-1α mRNA表達(dá)量均顯著增高（P＜0.05）。低劑量組與高

9、劑量組有顯著差異(P＜0.05)。
　　5.各組大鼠心肌NRF-1基因的表達(dá)量比較:各組均顯著高于對照組(P＜0.05)，且6h組表達(dá)量最高。與相同時相的力竭組相比，低劑量力竭即刻組、6h組，高劑量各組大鼠心肌的NRF-1 mRNA表達(dá)量均顯著增高(P＜0.05)。低劑量組與高劑量組有顯著差異(P＜0.05)。
　　6.各組大鼠心肌NRF-2基因的表達(dá)量比較:除力竭24h組外，其他各組均顯著高于對照組(P＜0.05)，且6h

10、組表達(dá)量最高。與相同時相的力竭組相比，除低劑量12h組外，其余各組大鼠心肌的NRF-2 mRNA表達(dá)量均顯著增高(P＜0.05)，且低劑量組與高劑量組有顯著差異(P＜0.05)。
　　7.各組大鼠心肌PGC-1α蛋白的表達(dá)量比較:與對照組(0.9419±0.0226)相比，低劑量力竭6h組(1.0932±0.0772)和高劑量力竭后6h組(1.2348±0.0740)顯著增高(P＜0.05)，力竭各組、低劑量力竭即刻組(0.551

11、4±0.0319)、12h組(0.8410±0.0295)、24h組(0.7405±0.0303)、高劑量力竭即刻組(0.4831±0.0449)、24h組(0.6603±0.0231)組顯著降低(P＜0.05)。各組的PGC-1α蛋白表達(dá)量均在力竭后即刻組表達(dá)量最低，6h組表達(dá)量最高，有顯著性差異。與相同時相的力竭組相比，低劑量及高劑量各組大鼠心肌的PGC-1α蛋白的表達(dá)量均顯著增高(P＜0.05)，且低劑量組與高劑量組有顯著差異(P

12、＜0.05)。
　　8.各組大鼠心肌NRF-1蛋白的表達(dá)量比較:與對照組(0.8574±0.0180)相比，低劑量力竭6h組(0.9352±0.0190)、24h組(0.9252±0.0344)顯著增高，力竭即刻組(0.7313±0.0343)、6h組(0.7132±0.0377)、24h組(0.5910±0.0404)、低劑量力竭即刻組(0.7073±0.0241)、高劑量力竭即刻組(0.6135±0.0384)、12h組(0.

13、5646±0.0217)、24h組(0.5617±0.0283)顯著降低(P＜0.05)。與相同時相的力竭組相比，低劑量力竭6h組、12h組、24h組大鼠心肌的NRF-1蛋白的表達(dá)量均顯著增高(P＜0.05)，高劑量力竭即刻組、12h組大鼠心肌的NRF-1蛋白的表達(dá)量均顯著降低(P＜0.05)。低劑量組與高劑量組有顯著差異(P＜0.05)。
　　9.各組大鼠心肌NRF-2蛋白的表達(dá)量比較:與對照組(0.7523±0.0333)相比

14、，低劑量力竭12h組(1.0281±0.0954)、高劑量力竭6h組(1.0295±0.0506)、12h組(1.1343±0.0632)、24h組(0.8346±0.0371)顯著增高(P＜0.05)，力竭即刻組(0.3624±0.0532)、6h組(0.6601±0.0231)、24h組(0.6752±0.0337)、低劑量力竭即刻組(0.5509±0.0374)、24h組(0.6725±0.0122)、高劑量即刻組(0.6020±

15、0.0173)顯著降低(P＜0.05)。各組NRF-2蛋白的表達(dá)量均為12h組表達(dá)量最高，即刻組表達(dá)量最低，且有顯著性差異。與相同時相的力竭組相比，低劑量力竭即刻組、6h組、12h組，高劑量各組大鼠心肌的NRF-2蛋白的表達(dá)量均顯著增高(P＜0.05)，且低劑量組與高劑量組有顯著差異(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.一次性力竭運(yùn)動會造成大鼠心肌損傷。一次性力竭運(yùn)動后PGC-1αmRNA誘導(dǎo)NRF-1及NRF-2 mRN