紅景天苷通過線粒體凋亡途徑調(diào)節(jié)PASMCs的低氧增殖.pdf

1、目的：
　　以小鼠離體肺動脈平滑肌細胞(pulmonary arterial smooth muscle cells，PASMCs)為研究對象，探索紅景天苷(Salidroside，Sal)對肺動脈平滑肌細胞低氧性增殖、線粒體途徑凋亡的影響及其可能的調(diào)節(jié)機制。
　　方法：
　　采用本研究室建立的膠原酶Ⅰ消化結(jié)合血清鋪底法，離體原代培養(yǎng)BALB/c小鼠肺動脈平滑肌細胞。用免疫化學(xué)染色法和免疫熒光染色法鑒定小鼠PASMCs

2、確定純度并傳代。用CCK-8染色法測定常氧及72小時低氧情況下小鼠PASMCs的活性，及不同濃度紅景天苷（100μM，200μM，400μM，800μM，1600μM）對低氧小鼠PASMCs活性的抑制，并選擇合適濃度。實驗分4組:常氧對照(Normoxiccontrol，N)組、低氧(hypoxia，H)組、H+CGS（CGS-21680-A2AR激動劑，CGS）組、H+Sal(Salidroside，Sal)組。所有低氧組均在低氧培養(yǎng)

3、箱中按照5％CO2，7％O2，88％N2的條件，37℃培養(yǎng)72小時。CCK-8染色法檢測各組PASMCs增殖情況。TUNEL法檢測各組PASMCs凋亡情況。免疫熒光染色法檢測各組PASMCs的Bax蛋白、Bcl-2蛋白表達。Western-Blot法檢測各組PASMCs的A2AR蛋白、Bax蛋白、Bcl-2蛋白表達。
　　結(jié)果：
　　1.與常氧小鼠PASMCs比較，72小時低氧情況下PASMCs CCK-8的A值顯著升高(P

4、＜0.05);紅景天苷濃度為100μM時，低氧PASMCs的A值開始下降，但未達到統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);濃度在200μM-1600μM之間，A值較單純低氧組明顯下降(P＜0.05)，并呈量效關(guān)系;而與紅景天苷濃度為800μM的低氧組相比，紅景天濃度為1600μM低氧組的A值沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2.各組CCK-8的吸光度(absorbance，A)值:低氧組較對照組升高(P＜0.05)，H+CGS組和H+Sa

5、l組均較低氧組下降（P均＜0.05）。表明CGS和紅景天苷均可顯著抑制低氧誘導(dǎo)的肺動脈平滑肌細胞增殖。
　　3.各組Tunel的凋亡指數(shù)(apoptosis index，AI):低氧組較對照組降低(P＜0.01)，H+CGS組和H+Sal組均較低氧組升高（P均＜0.01)。表明肺動脈平滑肌細胞低氧情況下凋亡減少，CGS和紅景天苷均可以明顯增加肺動脈平滑肌細胞低氧情況下的凋亡。
　　4.各組Bax、Bcl-2蛋白熒光強度(fu

6、orescence intensity，F(xiàn)I):與對照組相比，低氧組Bax蛋白熒光強度降低(P＜0.01)，Bcl-2蛋白熒光強度升高(P＜0.01);H+CGS組和H+Sal組Bax、Bcl-2蛋白熒光強度均較低氧組升高（P均＜0.01）。
　　5.各組Bcl-2/Bax蛋白熒光強度比值:低氧組Bcl-2/Bax蛋白熒光強度比值較對照組升高(P＜0.01)，H+CGS組和H+Sal組Bcl-2/Bax蛋白熒光強度比值較低氧組均降

7、低（P均＜0.01）。
　　6.各組A2AR蛋白表達:低氧組A2AR蛋白表達較對照組明顯升高(P＜0.01)，而H+CGS組和H+Sal組A2AR蛋白表達均較低氧組明顯升高（P均＜0.01）。
　　7.各組Bax、Bcl-2蛋白表達:與對照組相比，低氧組Bax蛋白表達降低(P＜0.01)，Bcl-2蛋白表達升高(P＜0.01); H+CGS組和H+Sal組Bax、Bcl-2蛋白表達均較低氧組升高（P均＜0.01）。