抗斑馬魚血管生成中藥鱉甲、青皮對VEGF、Notch-Dll4通路的調控作用.pdf

1、目的：
　　以血管發(fā)育為治療靶點，包括抑制血管和促血管治療等已經成為諸如癌癥、心血管疾病等常見疾病的新興治療手段。然而，對于血管發(fā)育的過程以及其分子調節(jié)機制了解還不完全。動脈和靜脈血管是血管系統(tǒng)發(fā)育過程中最早形成的重要部分，它們對于胚胎和成體都具有重要的作用，但它們之間在結構和功能上卻又不盡相同。
　　血管內皮生長因子VEGF家族被認為是最為重要的分泌型促血管生成因子，在胚胎血管系統(tǒng)發(fā)育和腫瘤血管生成過程中均發(fā)揮重要作用。在

2、血管發(fā)育過程中VEGF、Notch信號通路關系密切，雖然可各自獨立發(fā)揮不同作用，但二者之間也存在相互作用。
　　中醫(yī)藥治療腫瘤已有上千年的歷史，積累了豐富的臨床資料，軟堅散結是治療腫瘤主要大法，對于這類藥物在抗血管新生方面作用值得進一步研究。
　　本實驗以TG品系的fli1a-EGFP轉基因斑馬魚為模型，利用其綠色熒光蛋白顯影特質，在顯微鏡下觀察鱉甲水提物及青皮水提物對斑馬魚體內血管生成的抑制效果，并且，借此進一步研究具有抗

3、新生血管作用的鱉甲、青皮對VEGF、Notch/Dll4通路的調控作用。
　　方法：
　　1、選用TG品系的fli1a-EGFP轉基因斑馬魚為生物模型。將新鮮配置好的鱉甲、青皮提取物處理受精后的斑馬魚胚胎，藥物處理實驗結束后，將各組胚胎在體式熒光顯微鏡下進行血管表型觀察和拍照，以分析各個樣品對斑馬魚體節(jié)間血管（ISVs）生成的影響。
　　2、利用實時熒光定量PCR技術檢測斑馬魚胚胎受到鱉甲、青皮水提物處理后，Notch

4、信號通路中Dll4/Notch1a/HEY2/EFNB2a以及VEGF信號通路中VEGFaa/VEGFR1/VEGFR2的表達情況，研究這兩個信號通路在斑馬魚胚胎發(fā)育過程中的生理學作用。
　　結果：
　　1、與陰性對照組相比，鱉甲水提物組、青皮水提物組干預的實驗組斑馬魚胚胎ISVs及DLAV的熒光表達均具有差異，提示中藥水提物組具有抑制斑馬魚新生血管生成的作用。
　　2、鱉甲、青皮兩種水提物均能夠顯著上調斑馬魚胚胎Dl

5、l4、Notch1a、HEY2表達水平（P<0.05）。青皮水提物能夠非常顯著上調斑馬魚胚胎EFNB2a表達水平（P<0.01）。可以推測兩種中藥水提物抑制斑馬魚胚胎新生血管生成與Notch-Dll4通路上調活化有關。
　　3、鱉甲、青皮兩種水提物能夠顯著上調斑馬魚胚胎VEGFaa，其中青皮水提物組尤為顯著（p<0.01）；,鱉甲、青皮兩種中藥水提物能夠顯著上調斑馬魚胚胎VEGFR1，（p<0.01）；鱉甲、青皮兩種中藥水提物能夠

6、顯著上調斑馬魚胚胎VEGFR2表達水平，其中青皮水提物組尤為顯著（p<0.01）可以推測兩種中藥水提物能夠活化VEGF通路。
　　4、瓦他拉尼組較空白對照組VEGFaa基因表達水平明顯上升，（p<0.05）；瓦他拉尼能明顯抑制斑馬魚胚胎VEGFR1/VEGFR2的mRNA表達水平，（p<0.01）。
　　結論：
　　1、鱉甲、青皮水提物在轉基因斑馬魚生物模型上具有抑制新生血管的作用；
　　2、鱉甲及青皮水提物抑制