綠茶提取物EGCG抗乙型肝炎病毒的分子機理研究.pdf

1、乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是導致乙型肝炎及相關疾病的主要病因,由于現(xiàn)有臨床藥物的諸多缺陷,從天然提取物中篩選新型的抗HBV藥物,并對其作用機理進行研究是HBV研究的熱點之一。本論文是在前期研究結果綠茶提取物具有較強的抗乙肝病毒作用的基礎上,利用HBV穩(wěn)定表達細胞系HepG2.2.15,對綠茶提取物的抗HBV作用及其機理進行更深一步的研究和探索。
　　 實驗采用MTT法分析了不同濃度梯度的綠茶提取物

2、單體表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)、表兒茶素沒食子酸酯(epicatechin gallate,ECG)、表沒食子兒茶素(epigallocatechin,EGC)、表兒茶素(epicatechin,EC)、兒茶素(catechin,C)等幾種主要成分對HepG2.2.15細胞的毒性,并在安全濃度范圍內分析了這5種單體成分的抗HBV效果,ELISA結果顯示,EGCG、EGC、ECG

3、和EC對HBV的抗原表達都有較強抑制作用,其中EGCG抑制HBsAg和HBeAg效果最強,作用9天的抑制效果均能高達99.9％以上,而EGC和ECG次之,其對HBsAg和HBeAg表達的抑制率達到95％以上,EC對HBeAg的抑制率接近50％,因此EGCG是我們得出的優(yōu)選成分。
　　 為進一步研究EGCG抗HBV的分子作用機理,實驗采用不同濃度的EGCG對調節(jié)HBV轉錄和復制起關鍵作用的肝富集轉錄因子:肝細胞核因子1(hepat

4、ocyte nuclear factor1,HNF1)、HNF3、HNF4、視黃醇X受體(retinoid X receptor,RXR)、過氧化物酶增殖激活受體(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)和法尼酯X受體(farnesoid X receptor,FXR)等的表達進行半定量RT-PCR分析。結果表明,隨著EGCG作用濃度的增加,HNF1α和HNF4α的表達變化不明顯,

5、HNF3β和PPARα的表達有較弱的下調趨勢,而EGCG能夠明顯下調RXRα和FXRα的表達量,隨著藥物濃度的增加,抑制作用逐漸增強。通過用L02細胞和HepG2細胞做對比分析,結果表明,不同濃度的EGCG對這兩種細胞中RXRα的表達沒有影響。在沒有EGCG作用時,三種細胞中RXRα的表達量沒有明顯差異,而FXRα在L02、HepG2、HepG2.2.15三種細胞中的表達量依次升高,說明HBV基因組的存在上調了FXRα的表達。因此,EG