肝素對膿毒癥大鼠腸上皮細胞通透性及occludin蛋白表達的研究.pdf

1、目的：觀察膿毒癥大鼠腸上皮細胞緊密連接電鏡下的典型表現(xiàn)，及Occludin蛋白在大鼠腸上皮細胞的表達，驗證腸上皮通透性是否改變;驗證肝素對膿毒癥大鼠腸上皮細胞通透性具有保護作用。
　　 方法：
　　 健康SPF級SD大鼠60只，雌雄不限，體重180-220克隨機分為生理鹽水組、膿毒癥組、膿毒癥+肝素組。生理鹽水組:(n=20):腹腔注射等體積（1毫升）生理鹽水，膿毒癥組:(n=20):單次腹腔輸注致死量LPS，10mg/

2、kg;膿毒癥+肝素組:(n=20):LPS(10mg/kg)造模后兩小時肝素干預(100U/kg)。六小時后斷頸法處死大鼠，常規(guī)碘伏消毒腹部皮膚，無菌入腹，肉眼觀察腹腔內炎癥情況，胰腺改變，腸管有無擴張、充血、水腫;回腸標本病理切片100×光鏡下觀察小腸黏膜損傷程度;電鏡下觀察腸上皮細胞超微結構及緊密連接變化，免疫組織化學法檢測大鼠腸黏膜上皮間緊密連接蛋白occludin分布和表達的變化。
　　 結果：
　　 腹腔內改變

3、:肉眼見生理鹽水組大鼠腹腔內無明顯炎癥征象，腸管無水腫充血;膿毒癥組和膿毒癥+肝素組大鼠均有不同程度的腹水，腸管水腫，充血。相比之下膿毒癥組腸管充血、水腫更為顯著。腸黏膜病理學檢查:生理鹽水組腸黏膜未見明顯損傷，膿毒癥組和膿毒癥+肝素組大鼠回腸可見不同程度的腸黏膜破壞;膿毒癥組可見腸黏膜內炎癥細胞浸潤，間質水腫，絨毛形態(tài)不規(guī)則，黏膜糜爛壞死，與生理鹽水組比較，P＜0.05;膿毒癥+肝素組可見腸壁炎細胞浸潤，腸壁水腫，絨毛上皮下間隙擴大，

4、但程度較膿毒癥組輕(P＜0.05)。電鏡結果示:膿毒癥組可見上皮細胞表面微絨毛排列紊亂，部分斷裂，上皮細胞緊密連接增寬;膿毒癥+肝素組可見上皮細胞表面微絨毛豐富，排列規(guī)則，緊密連接無明顯增寬，膿毒癥組緊密連接明顯低于膿毒癥+肝素組，具有顯著性差異。免疫組化結果示:生理鹽水組occludin蛋白主要沿大鼠腸黏膜上皮細胞膜的頂端呈線狀分布，呈表達很強的棕褐色信號，膿毒癥型組occludin陽性染色較生理鹽水生理鹽水組明顯減弱，呈非連續(xù)性分布

5、(P＜0.05);膿毒癥+肝素組occludin陽性表達較膿毒癥組明顯增高，呈連續(xù)性分布(P＜0.05)。
　　 結論：
　　 腹腔注射LPS后，大鼠有不同程度的腹水，腸管水腫，充血;HE染色可見腸黏膜內炎癥細胞浸潤，間質水腫，絨毛形態(tài)不規(guī)則;電鏡顯示上皮細胞表面微絨毛排列紊亂，部分斷裂，上皮細胞緊密連接增寬;免疫組化結果示occludin陽性染色較生理鹽水組明顯減弱，呈非連續(xù)性分布;而應用肝素干預后，腸管水腫充血較輕，