TCF7L2影響胰島素分泌機(jī)制的研究.pdf

1、目的：探討TCF7L2影響葡萄糖分泌的機(jī)制。轉(zhuǎn)錄因子TCF7L2與GPR40基因啟動(dòng)子的相互作用。研究慢病毒介導(dǎo)RNA干擾(RNAi)致TCF7L2基因沉默對(duì)胰島p細(xì)胞GPR40表達(dá)的影響。
　　方法：(1)采用染色質(zhì)免疫沉淀(CHIP)技術(shù)，在胰島βTC6細(xì)胞株中，用TCF7L2特異性抗體沉淀DNA，聚合酶聯(lián)式反應(yīng)(PCR)檢測(cè)GPR40基因5’特異性序列。(2)構(gòu)建小鼠TCF7L2基因RNAi慢病毒載體，感染小鼠胰島βTC6細(xì)

2、胞株，進(jìn)行Real time-PCR及Westernblotting鑒定干擾效率；(3)檢測(cè)對(duì)照組與干擾組葡萄糖刺激后胰島素分泌(GSIS)情況；(4)Real time-PCR及Western blotting檢測(cè)TCF7L2穩(wěn)定下調(diào)的小鼠胰島βTC6細(xì)胞中GPR40mRNA以及蛋白水平。
　　結(jié)果：(1)在TCF7L2特異性抗體免疫沉淀的DNA片段中，擴(kuò)增出GPR40基因5’特異性序列。(2)成功構(gòu)建小鼠TCF7L2基因RNA

3、i慢病毒載體，使小鼠胰島βTC6細(xì)胞中TCF7L2 mRNA以及蛋白水平顯著下調(diào)，TCF7L2的mRNA表達(dá)量較空白組與對(duì)照組分別下降72％以及78％(P<0.05)，TCF7L2的蛋白量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；(3)干擾組中葡萄糖刺激的胰島素分泌較對(duì)照組下降(P<0.05)；(4)TCF7L2基因穩(wěn)定下調(diào)后，胰島βTC6細(xì)胞中GPR40mRNA以及蛋白水平明顯下調(diào)，GPR40的mRNA表達(dá)量較空白組與對(duì)照組分別下降78％以及8