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文檔簡介
1、本文研究了核受體RXR在炎癥刺激誘導(dǎo)單核/巨噬細(xì)胞分化中的作用。 單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化是動脈粥樣硬化炎癥發(fā)展過程中的關(guān)鍵一步。在單核細(xì)胞分化過程中,細(xì)胞形態(tài)變?yōu)樗笮位蚍种?、?xì)胞貼壁能力、細(xì)胞表面分化標(biāo)志物(CD11b、CD36)和基質(zhì)金屬蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase-9,MMP-9)上調(diào),這些可以作為單核/巨噬細(xì)胞分化的指標(biāo)。 本研究通過以上分化指標(biāo)的變化,分別從體外、體內(nèi)兩部分實驗
2、觀察視黃醇X受體(Retinoid X Receptors, RXRs)特異性激動劑9-順式維甲酸(9-cisRetinoic Acid,9-cisRA)對炎癥刺激誘導(dǎo)單核/巨噬細(xì)胞分化的影響。 第一部分為體外實驗:通過培養(yǎng)THP-1人單核細(xì)胞系,用佛波酯(PMA)誘導(dǎo)分化為巨噬細(xì)胞,同時9-cisRA進(jìn)行干預(yù),通過細(xì)胞形態(tài)、四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT)檢測細(xì)胞貼壁率、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物(CD11b、CD36)、R
3、T-PCR和Western blotting方法檢測MMP-9基因及蛋白水平表達(dá)、Gelatin Zymography法檢測細(xì)胞上清中MMP-9活性,觀察9-cisRA對THP-1單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化的影響。實驗結(jié)果顯示9-cisRA干預(yù)組梭形、分支狀細(xì)胞明顯減少,與PMA單獨作用組相比細(xì)胞貼壁率比減少約50%,細(xì)胞表面CD11b、CD36表達(dá)分別減少49.98%、28.19%,MMP-9的mRNA、蛋白水平及酶活力明顯降低,研究結(jié)果
4、證明9-cisRA抑制PMA誘導(dǎo)的THP-1單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化。 第二部分為體內(nèi)實驗:通過Concanavalin A(ConA)誘導(dǎo)BALB/C小鼠腹膜炎性巨噬細(xì)胞模型,利用9-cisRA(50μg/Kg/d)腹腔注射干預(yù),通過細(xì)胞形態(tài)、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物(CD11b、CD36)、RT-PCR和Western blotting方法分別檢測MMP-9基因及蛋白水平表達(dá),觀察9-cisRA對小鼠腹膜炎性巨噬細(xì)胞分化
5、的影響。體內(nèi)實驗結(jié)果顯示9-cisRA腹腔注射干預(yù)組梭形、分支狀細(xì)胞明顯減少,與對照組相比細(xì)胞表面CD11b、CD36表達(dá)分別減少32.10%、41.86%,MMP-9的mRNA、蛋白水平顯著下降。研究結(jié)果證明9-cisRA可抑制小鼠腹膜炎性巨噬細(xì)胞分化。 體外、體內(nèi)研究結(jié)果顯示RXRs特異性激動劑9-cisRA可以顯著抑制炎癥刺激誘導(dǎo)的單核/巨噬細(xì)胞分化,提示RXRs可能是調(diào)控單核/巨噬細(xì)胞分化的重要途徑,上調(diào)RXRs活性可
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