核受體RXR在炎癥刺激誘導(dǎo)單核-巨噬細(xì)胞分化中的作用研究.pdf

1、本文研究了核受體RXR在炎癥刺激誘導(dǎo)單核/巨噬細(xì)胞分化中的作用。 單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化是動脈粥樣硬化炎癥發(fā)展過程中的關(guān)鍵一步。在單核細(xì)胞分化過程中，細(xì)胞形態(tài)變?yōu)樗笮位蚍种?、?xì)胞貼壁能力、細(xì)胞表面分化標(biāo)志物（CD11b、CD36）和基質(zhì)金屬蛋白酶-9（Matrix metalloproteinase-9,MMP-9）上調(diào)，這些可以作為單核/巨噬細(xì)胞分化的指標(biāo)。 本研究通過以上分化指標(biāo)的變化，分別從體外、體內(nèi)兩部分實驗

2、觀察視黃醇X受體（Retinoid X Receptors, RXRs）特異性激動劑9-順式維甲酸（9-cisRetinoic Acid,9-cisRA）對炎癥刺激誘導(dǎo)單核/巨噬細(xì)胞分化的影響。 第一部分為體外實驗：通過培養(yǎng)THP-1人單核細(xì)胞系，用佛波酯（PMA）誘導(dǎo)分化為巨噬細(xì)胞，同時9-cisRA進(jìn)行干預(yù)，通過細(xì)胞形態(tài)、四甲基偶氮唑鹽比色法（MTT）檢測細(xì)胞貼壁率、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物（CD11b、CD36）、R

3、T-PCR和Western blotting方法檢測MMP-9基因及蛋白水平表達(dá)、Gelatin Zymography法檢測細(xì)胞上清中MMP-9活性，觀察9-cisRA對THP-1單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化的影響。實驗結(jié)果顯示9-cisRA干預(yù)組梭形、分支狀細(xì)胞明顯減少，與PMA單獨作用組相比細(xì)胞貼壁率比減少約50％，細(xì)胞表面CD11b、CD36表達(dá)分別減少49.98％、28.19％，MMP-9的mRNA、蛋白水平及酶活力明顯降低，研究結(jié)果

4、證明9-cisRA抑制PMA誘導(dǎo)的THP-1單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化。 第二部分為體內(nèi)實驗：通過Concanavalin A（ConA）誘導(dǎo)BALB/C小鼠腹膜炎性巨噬細(xì)胞模型，利用9-cisRA（50μg/Kg/d）腹腔注射干預(yù)，通過細(xì)胞形態(tài)、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物（CD11b、CD36）、RT-PCR和Western blotting方法分別檢測MMP-9基因及蛋白水平表達(dá)，觀察9-cisRA對小鼠腹膜炎性巨噬細(xì)胞分化

5、的影響。體內(nèi)實驗結(jié)果顯示9-cisRA腹腔注射干預(yù)組梭形、分支狀細(xì)胞明顯減少，與對照組相比細(xì)胞表面CD11b、CD36表達(dá)分別減少32.10％、41.86％，MMP-9的mRNA、蛋白水平顯著下降。研究結(jié)果證明9-cisRA可抑制小鼠腹膜炎性巨噬細(xì)胞分化。 體外、體內(nèi)研究結(jié)果顯示RXRs特異性激動劑9-cisRA可以顯著抑制炎癥刺激誘導(dǎo)的單核/巨噬細(xì)胞分化，提示RXRs可能是調(diào)控單核/巨噬細(xì)胞分化的重要途徑，上調(diào)RXRs活性可