巨噬細胞與肝實質(zhì)細胞在肝臟代謝性炎癥發(fā)生中的作用的實驗研究.pdf

1、目的:研究巨噬細胞與肝實質(zhì)細胞在肝臟代謝性炎癥發(fā)生中的作用及其可能機制。
　　方法:選用不同濃度的軟脂酸（Palmitic Acid，PA）(0mmol/L、0.08mmol/L、0.16mmol/L、0.32mmol/L)分別單獨處理HepG2細胞以及THP-1來源巨噬細胞（以下簡稱:巨噬細胞），24h后運用MTT法檢測不同濃度PA對細胞增殖的影響，同時運用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-time PCR)以及免疫印跡法(w

2、estern blot)分別檢測兩種細胞中各炎癥因子(IL-1β、IL-6、TNF-a)的基因表達水平以及蛋白表達水平;然后選用0.4μm孔徑大小的Transwell小室建立HepG2細胞與巨噬細胞的共培養(yǎng)體系，選用PA(0.16 mmol/L)處理細胞24h后分別檢測HepG2細胞及巨噬細胞中(IL-1β、IL-6、TNF-a)及巨噬細胞(MCP-1、Mannose-R、CD163)的基因表達水平;同時，采用5μm孔徑大小的Trans

3、well小室建立HepG2細胞與巨噬細胞共培養(yǎng)體系，選用0.1％結(jié)晶紫染色法(crystal violet staining)觀察巨噬細胞的遷移情況。
　　結(jié)果:在不同濃度PA(0.08mmol/L、0.16mmol/L、0.32mmol/L)處理下，PA對HepG2細胞及巨噬細胞的增殖的影響無統(tǒng)計學(xué)意義，在兩種細胞中各炎癥因子(IL-1β、IL-6、TNF-a)基因表達水平及蛋白表達水平均較對照組增加;將HepG2細胞與巨噬細胞

4、共培養(yǎng)后，HepG2細胞及巨噬細胞中各炎癥因子基因表達水平均較對照組（HepG2細胞或巨噬細胞單獨培養(yǎng)組）升高，其中，在有PA(0.16mmol/L)處理下時，這種升高趨勢更為明顯;結(jié)晶紫染色顯示，共培養(yǎng)后巨噬細胞遷移的數(shù)量明顯增加，巨噬細胞中MCP-1的基因表達水平均較對照組明顯升高;而CD163、Mannose-R基因表達較對照組明顯下降。
　　結(jié)論:軟脂酸能分別誘導(dǎo)HepG2細胞和巨噬細胞的炎癥產(chǎn)生，當(dāng)兩種細胞共培養(yǎng)后，細胞