巨噬細(xì)胞與肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞在肝臟代謝性炎癥發(fā)生中的作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:研究巨噬細(xì)胞與肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞在肝臟代謝性炎癥發(fā)生中的作用及其可能機(jī)制。
　　方法:選用不同濃度的軟脂酸（Palmitic Acid，PA）(0mmol/L、0.08mmol/L、0.16mmol/L、0.32mmol/L)分別單獨(dú)處理HepG2細(xì)胞以及THP-1來源巨噬細(xì)胞（以下簡稱:巨噬細(xì)胞），24h后運(yùn)用MTT法檢測不同濃度PA對(duì)細(xì)胞增殖的影響，同時(shí)運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-time PCR)以及免疫印跡法(w

2、estern blot)分別檢測兩種細(xì)胞中各炎癥因子(IL-1β、IL-6、TNF-a)的基因表達(dá)水平以及蛋白表達(dá)水平;然后選用0.4μm孔徑大小的Transwell小室建立HepG2細(xì)胞與巨噬細(xì)胞的共培養(yǎng)體系，選用PA(0.16 mmol/L)處理細(xì)胞24h后分別檢測HepG2細(xì)胞及巨噬細(xì)胞中(IL-1β、IL-6、TNF-a)及巨噬細(xì)胞(MCP-1、Mannose-R、CD163)的基因表達(dá)水平;同時(shí)，采用5μm孔徑大小的Trans

3、well小室建立HepG2細(xì)胞與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)體系，選用0.1％結(jié)晶紫染色法(crystal violet staining)觀察巨噬細(xì)胞的遷移情況。
　　結(jié)果:在不同濃度PA(0.08mmol/L、0.16mmol/L、0.32mmol/L)處理下，PA對(duì)HepG2細(xì)胞及巨噬細(xì)胞的增殖的影響無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在兩種細(xì)胞中各炎癥因子(IL-1β、IL-6、TNF-a)基因表達(dá)水平及蛋白表達(dá)水平均較對(duì)照組增加;將HepG2細(xì)胞與巨噬細(xì)胞

4、共培養(yǎng)后，HepG2細(xì)胞及巨噬細(xì)胞中各炎癥因子基因表達(dá)水平均較對(duì)照組（HepG2細(xì)胞或巨噬細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)組）升高，其中，在有PA(0.16mmol/L)處理下時(shí)，這種升高趨勢(shì)更為明顯;結(jié)晶紫染色顯示，共培養(yǎng)后巨噬細(xì)胞遷移的數(shù)量明顯增加，巨噬細(xì)胞中MCP-1的基因表達(dá)水平均較對(duì)照組明顯升高;而CD163、Mannose-R基因表達(dá)較對(duì)照組明顯下降。
　　結(jié)論:軟脂酸能分別誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的炎癥產(chǎn)生，當(dāng)兩種細(xì)胞共培養(yǎng)后，細(xì)胞