UHLP的制備及質(zhì)量初步研究.pdf

1、尿酸是嘌呤代謝的產(chǎn)物，血液中過量積累尿酸會(huì)使尿酸鈉結(jié)晶沉積在遠(yuǎn)端關(guān)節(jié)周圍相對(duì)缺乏血管的組織中，從而導(dǎo)致痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎。尿酸酶（Uricase，UC）可降低血液中尿酸的濃度，在臨床上，UC主要用于尿酸水平的診斷和與尿酸水平升高相關(guān)疾病的治療。但是UC具有半衰期短，生物利用度低和穩(wěn)定性差等缺點(diǎn)，因此大大限制了其臨床使用。
　　脂質(zhì)體（Liposomes，LP）是一種定向藥物載體，屬于靶向給藥系統(tǒng)。它具有生物膜相似性，能提高被包封藥物的穩(wěn)

2、定性，降低藥物毒副作用，提高藥物生物利用度，并兼具靶向和緩釋的作用。透明質(zhì)酸可靶向到透明質(zhì)酸受體CD44和CD168，減少炎性細(xì)胞的數(shù)量，調(diào)整細(xì)胞因子的表達(dá)，對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)組織起保護(hù)作用。外源性透明質(zhì)酸還可通過促進(jìn)內(nèi)源性透明質(zhì)酸合成來改善病理性關(guān)節(jié)液的性狀，達(dá)到持續(xù)緩解痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎癥狀、延緩?fù)达L(fēng)性關(guān)節(jié)炎病情的作用。
　　本文將UC制備成透明質(zhì)酸修飾的尿酸酶脂質(zhì)體（Hyaluronic acid-uricase liposomes，U

3、HLP），希望不僅能提高UC的活性、穩(wěn)定性、而且能能延長UC半衰期，提高生物利用度，增加降尿酸作用，為UHLP進(jìn)一步研究打下基礎(chǔ)。
　　本文研究?jī)?nèi)容主要分為五個(gè)部分：
　　第一部分采用逆向蒸發(fā)法制備了UHLP，采用葡聚糖凝膠柱法測(cè)定UHLP包封率，使用JEM-1400Plus型透射電子顯微鏡測(cè)定了UHLP的透射電鏡圖，使用馬爾文粒度儀測(cè)定UHLP粒徑、Zeta電位。結(jié)果表明：成功制備了UHLP，UHLP外觀呈均勻乳白色，透射

4、電鏡下為分布均勻的圓形或橢圓形，其平均包封率約為60%，平均粒徑約為330 nm，平均Zeta電位約為-20 mV。
　　第二部分考察了UHLP在體外的活性。測(cè)定了UHLP的最適溫度、最適pH以及UHLP中UC、UC在最適溫度、最適pH下的活性大小。結(jié)果表明：UHLP中UC最適溫度為40℃，UHLP中UC最適pH由8.5降為8.0，UHLP中UC的活性均高于游離UC。
　　第三部分考察了UHLP的體外穩(wěn)定性。通過對(duì)貯存穩(wěn)定性

5、、熱穩(wěn)定性、酸堿穩(wěn)定性、血漿穩(wěn)定性、抗胰蛋白酶水解能力進(jìn)行測(cè)定，考察兩者的體外穩(wěn)定性情況。結(jié)果表明：上述因素對(duì) UHLP的影響均小于游離UC。
　　第四部分考察了UHLP的藥代動(dòng)力學(xué)特性。通過測(cè)定大鼠血清中UC的活性，考察UHLP體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特性。UHLP的體內(nèi)代謝動(dòng)力學(xué)考察中，將所得的大鼠體內(nèi)血藥濃度使用DAS2.1.1藥動(dòng)學(xué)程序軟件進(jìn)行分析與統(tǒng)計(jì)，得到了靜脈注射UHLP的主要藥代動(dòng)力參數(shù)為：AUC(0-7h)為（234.3

6、9±25.30）U/L h，MRT(0-7h)為（2.03±0.12）h，Cmax為（93.91±8.03）U/L，Tmax為（0.75±0.00）h；靜脈注射UC的主要藥代動(dòng)力參數(shù)為：AUC(0-7h)為（44.00±5.73）U/L h，MRT(0-7h)為（0.59±0.05）h，Cmax為（86.87±8.94）U/L，Tmax為（0.17±0.00）h，生物等效性分析結(jié)果顯示UHLP和游離UC生物不等效。UHLP能改善UC的藥