小鼠血清糖蛋白質(zhì)組富集及鑒定.pdf

1、前言：糖基化修飾是蛋白質(zhì)翻譯后一種比較常見和重要的翻譯后修飾形式。糖基化修飾涉及到很多生理功能和生物學通路。蛋白質(zhì)糖基化形式的改變和很多重要疾病如:癌癥、炎癥反應(yīng)和神經(jīng)退行性疾病密切相關(guān)。糖蛋白成為疾病診斷、預(yù)后和對于藥物治療反應(yīng)的重要靶標?，F(xiàn)在得到廣泛研究是N-連接糖蛋白和O-連接糖蛋白。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)N-糖基化蛋白質(zhì)與多種重要的生理過程密切相關(guān)(如轉(zhuǎn)化生長因子-β1信號通路和表皮生長因子信號通路等),N-糖蛋白的還與多種疾病,特別是癌癥相

2、關(guān)(如肝癌、胰腺癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌等)。越來越多的研究表明,監(jiān)測某些N-糖基化蛋白質(zhì)的表達水平變化,較檢測這些蛋白質(zhì)的總體表達水平變化(如AFP),對疾病診斷具有更好的特異性和靈敏度。
　　 材料和方法
　　 一、實驗對象:選用5只C57小鼠血清混合進行實驗。
　　 二、方法:對于糖基化肽段的鑒定之前關(guān)注的很少,本課題我們關(guān)注了N-糖基化位點血清的分析。對于糖肽富集主要采用肼化學和凝集素的方法進行富集鑒定

3、實驗。肼化學方法是基于肼化學試劑與固相支持物相連接,通過糖苷酶F釋放N-連接糖基化肽段。通過串聯(lián)質(zhì)譜鑒定目的肽段。我們應(yīng)用此方法鑒定血清中分泌蛋白。
　　 結(jié)果：
　　 我們是用固相萃取N-連接糖肽,是用串聯(lián)質(zhì)譜鑒定N-連接糖基化位點。該方法氧化成醛,它可以固定在一個固相支持糖肽的碳水化合物上。隨著肼化學結(jié)合串聯(lián)質(zhì)譜分析,在93個蛋白中鑒定到108個糖基化位點。
　　 在本課題中,我們把重點方法大規(guī)模鑒定糖肽的方

4、法學。這種方法被稱作濾膜輔助的樣品制備。用三種凝集素CoA,WGA和RCA120聯(lián)合富集。方法的原理是基于糖肽和親和捕捉試劑的結(jié)合,在超濾管中進行蛋白的消化酶切。然后是由糖苷酶切去糖肽,是用串聯(lián)質(zhì)譜方法鑒定去糖基化肽段。本實驗從小鼠血清中得到381個非冗余糖基化肽段和319糖蛋白。而且這些鑒定到的肽段全部嚴格含有N-X-[S/T]-X(其中X為非脯氨酸)序列,不含有N-X-C或無意序列。
　　 結(jié)論：
　　 本課題對于血