3-MA作用的內(nèi)皮祖細胞在大鼠深靜脈血栓中增殖情況的實驗研究.pdf

1、目的：觀察用3-MA(3-methlyadenine，3-MA，3-甲基腺嘌呤)作用的內(nèi)皮祖細胞(endothelial progenitor cells，EPCs)在大鼠深靜脈血栓中的增殖情況，為慢性深靜脈血栓的治療提供一種新的思路。
　　 方法：1.Ficoll法分離Wistar大鼠的骨髓單個核細胞(bone marrow-derivedmononuclear cells，BMMNCs)，EGM-2MV培養(yǎng)基誘導、培養(yǎng)、擴增

2、骨髓源性EPCs并鑒定。倒置顯微鏡觀察、MTT法檢測EPCs增殖情況。2.結(jié)扎大鼠腎下段下腔靜脈建立深靜脈血栓模型，隨機分成四組，每組15只。3.分組。A組：空白對照組，注射1ml培養(yǎng)基；B組：注射1ml含有105個EPCs的細胞懸液；C組：注射1ml濃度為5mmol/L的3-MA；D組：注射1ml含有105個EPCs的細胞懸液，注射前EPCs與5mmol/L的3-MA混合培養(yǎng)6h。4.應用Western blot檢測第14天各組血栓內(nèi)

3、自噬微管相關蛋白LC3Ⅱ、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)的蛋白表達。5.采用SPSS17.0軟件進行分析。
　　 結(jié)果：1.Ficoll法分離的大鼠骨髓單個核細胞，經(jīng)EGM-2MV培養(yǎng)基培養(yǎng)可在體外誘導分化為EPCs。2.下腔靜脈血栓模型構(gòu)建成功，腎下段下腔靜脈結(jié)扎法構(gòu)建血栓模型成功率高。3.Western blot結(jié)果顯示：①A、B、C、D四組LC3Ⅱ蛋白均有表達，C組、D組較A組、B組明顯下

4、調(diào)(P<0.05)；B組和A組、D組和C組之間差異無統(tǒng)計學意義。②A、B、C、D四組VEGF蛋白均表達，B組和D組較A組和C組表達明顯上調(diào)，D組蛋白表達較B組高(P<0.05)；C組和A組之間差異無統(tǒng)計學意義。③A、B、C、D四組bFGF蛋白，B組和D組較A組和C組表達明顯上調(diào)，D組蛋白表達均較B組高(P<0.05)；C組和A組之間差異無統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)論：將3-MA作用的EPCs移植到血栓模型后，EPCs的增殖能力提高，