針刺對云卵巢大鼠HPOA異常功能調(diào)整作用的信號轉(zhuǎn)導機制.pdf

1、第一部分
　　 “針刺灌流液”的作用機制
　　 目的:本文在去卵巢大鼠模型上,針刺處理一組特定穴位后,用推挽灌流技術收集正常大鼠性周期不同階段下丘腦內(nèi)側(cè)視前區(qū)(MPOA)和針刺后去卵巢大鼠MPOA灌流液,并將其微量注射到去卵巢大鼠下丘腦MPOA,觀察其產(chǎn)生的效應,以比較生理條件下神經(jīng)內(nèi)分泌信號傳導通路和針刺處理后病理條件下信號傳導通路的異同,探討“針刺灌流液”的作用機制。
　　 材料和方法:采用切除雙側(cè)卵巢導致下

2、丘腦-垂體-卵巢軸(HPOA)功能異常的大鼠模型(OVX),連續(xù)三天給予電針“關元”為主的一組穴位處理,以電針后陰道脫落細胞重新出現(xiàn)和血E2水平明顯降低作為針效的指標。用腦核團推挽灌流技術,收集電針后去卵巢大鼠下丘腦MPOA的推挽灌流液,簡稱針刺灌流液(AP);另外,用推挽灌流技術,收集正常雌性大鼠性周期四個階段的MPOA灌流液。將不同的灌流液分別微量注射到去卵巢大鼠的MPOA,觀察它們各自對去卵巢大鼠陰道脫落細胞學和血雌二醇(E2)水

3、平的影響;用放射免疫法(RIA)和高效液相法(HPLC)測定各組灌流液中GnRH、多巴胺(DA)、γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)和β-內(nèi)啡肽(β-EP)的含量。然后對各組灌流液中的這些物質(zhì)量的變化進行比較分析。
　　 結(jié)果:正常性周期四個不同階段的灌流液中的DA、GABA、Glu和β-EP等神經(jīng)活性物質(zhì)的含量都出現(xiàn)規(guī)律性的改變,其中動情期GABA的含量和β-EP的含量與GnRH釋放量呈明顯的負相關

4、關系(r=-0.947,P＜0.01;r=-0.797,P＜0.05);MPOA微量注射正常性周期四個階段的灌流液后,去卵巢動物的陰道涂片脫落細胞和血E2水平,分別出現(xiàn)類似正常大鼠性周期四個階段的特征變化;AP中DA、GABA、Glu和β-EP的含量相對恒定,其中GABA的含量與GnRH釋放量也呈明顯的負相關關系(r=0.978,P＜0.05)。將AP微量注射到未經(jīng)電針處理的去卵巢大鼠MPOA后,陰道涂片成熟脫落上皮細胞重新出現(xiàn),血E2

5、升高,出現(xiàn)了類似針刺樣效應的變化。
　　 結(jié)論:正常性周期不同階段下丘腦MPOA灌流液和針刺灌流液中攜帶的主要信息分子可能由一些經(jīng)典神經(jīng)遞質(zhì)、氨基酸類遞質(zhì)和神經(jīng)肽等組成。這些信息分子承擔著機體本身所固有的聯(lián)系和調(diào)節(jié)神經(jīng).內(nèi)分泌兩大系統(tǒng)的信號傳遞:去卵巢大鼠MPOA的針刺灌流液可作為神經(jīng)內(nèi)分泌信號載體,把一個機體對HPOA調(diào)節(jié)信息傳遞給另一機體,為在離體組織或細胞上體現(xiàn)針刺效應,開展針刺信號傳/轉(zhuǎn)導的研究提供一種新的思路。

6、　　 第二部分
　　 針刺灌流液條件孵育下丘腦腦片對ERK、P38磷酸化的影響
　　 目的:AP條件孵育去卵巢大鼠下丘腦MPOA腦片,觀察針刺灌流液對ERK、P38磷酸化和ERK/MAPK級聯(lián)反應的影響,初步探討針刺信號在GnRH神經(jīng)元內(nèi)外進行傳/轉(zhuǎn)導通路。
　　 材料和方法:在冰浴中,將卵巢大鼠下丘腦MPOA快速制成2-3mm厚的腦片,分別在人工腦脊液和針刺灌流液條件下孵育,收集孵育液,用RIA測定孵育液中G

7、nRH釋放量,腦片用于測定ERK1/2、p38磷酸化的表達。
　　 結(jié)果:AP條件孵育后,孵育液中GnRH釋放量為82.07±14.7pg/ml,而人工腦脊液條件孵育后GnRH釋放量為55.49±10.4pg/m,經(jīng)AP條件孵育后,腦片釋放GnRH被明顯抑制了(P＜0.05);Western blot的結(jié)果表明,人工灌流液孵育的腦片pERK和tERK的相對光密度比值(relatively density)為0.2364±0.03

8、13。AP條件孵育后的pERK和tERK的相對光密度比值(relatively density)為0.0744±0.01。兩者相比,AP條件孵育后的去卵巢大鼠MPOA腦片ERK1/2磷酸化顯著下調(diào);人工灌流液條件孵育的腦片和AP條件孵育腦片后pP38和tP38的相對光密度比值(relatively density)分別為0.4374±0.0413,0.173±0.013,pP38和tP38的相對光密度比值也明顯下降(P＜0.05)。